Protéinase K, recombinante, de qualité PCR

Environ 2,0 U/mg de lyophilisat (2,5 U/mg de protéines) dans le dosage Chromozym (équivalant à 24 U/mg de lyophilisat [30 U/mg de protéines] dans le dosage hémoglobine).

La protéinase K est une sérine protéase apparentée à la subtilisine. L′enzyme recombinante est identique à la forme native de la protéase initialement isolée à partir du champignon Tritirachium album. Les spécifications de l′enzyme recombinante correspondent à celles de la forme native. La séquence d′acides aminés (poids moléculaire) et la structure moléculaire sont identiques. Cependant, la préparation recombinante est bien plus pure que l′enzyme native, car elle ne contient pas d′ADN et n′a pas de spécificité prononcée du site de clivage. Cette enzyme est extrêmement efficace sur les protéines natives, et peut donc être utilisée pour inactiver rapidement les nucléases endogènes comme les RNases et les DNases. Cette enzyme est également disponible sous forme de solution.

• Inhibiteurs : L′enzyme est inactivée par Pefabloc^® SC. Cependant, elle n′est pas inactivée par les ions métalliques, les agents chélateurs (comme l′EDTA), les réactifs sulfhydryles ou les inhibiteurs de trypsine ou de chymotrypsine.
• Activateurs : L′activité de la protéinase K est stimulée par les agents dénaturants (SDS et urée).
• pH optimal : La protéinase K est stable dans une vaste plage de pH (de 4 à 12,5). Cette enzyme maintient une activité complète pendant plusieurs heures lorsqu′elle est incubée à un pH compris entre 6,5 et 9,5.
• Activité volumique :

Environ 2,5 U/mg de lyophilisat (essai sur chromozyme).
Environ 30 U/mg de lyophilisat (essai sur hémoglobine).

Remarque : le SDS peut augmenter l′activité de la protéinase K jusqu′à sept fois.

Cette préparation ne contient pas de RNases, de DNases ou d′ADN, conformément aux procédures de contrôle qualité actuellement en vigueur.

• Absence de nucléases : Chaque lot est testé avec divers substrats afin de confirmer l′absence d′endonucléases, d′exonucléases, de ribonucléases et d′activité de coupure.
• Teneur en ADN : = 10 pg/mg d′enzyme (déterminée par la méthode des seuils)
• Biocharge : <125 ufc/g (déterminée par le test le plus strict de la Pharmacopée européenne, qui identifie le nombre total de bactéries aérobies, de levures et de champignons viables)

La protéinase K est l′une des endopeptidases connues les plus actives. Cette protéinase K de qualité PCR est particulièrement adaptée à l′isolement d′acides nucléiques pour les réactions d′amplification. En outre :

• Cette enzyme est extrêmement efficace sur les protéines natives, et peut donc être utilisée pour inactiver rapidement les nucléases endogènes comme les RNases et les DNases lors de l′isolement des acides nucléiques. Cette propriété rend la protéinase K particulièrement adaptée à l′isolement des formes natives d′ARN et d′ADN à partir de tissus ou de lignées cellulaires.
• Cette enzyme favorise la lyse cellulaire en activant un facteur autolytique bactérien.
• La protéinase K est utilisée pour l′analyse des structures membranaires en modifiant les protéines et glycoprotéines sur les surfaces cellulaires.
• Comme l′enzyme est testée pour vérifier l′absence de RNases et de DNases, et ne contient essentiellement pas d′ADN, elle est idéale pour isoler les matrices de PCR et de RT-PCR.
• La protéinase K peut également être utilisée pour éliminer les débris cellulaires lors du transfert des plages de lyse et pour traiter les coupes de tissus afin de favoriser une infiltration efficace des sondes dans les études d′hybridation in situ.

La protéinase K est l′une des endopeptidases connues les plus actives et ne présente pas de spécificité prononcée du site de clivage. La protéinase K coupe les protéines aux sites X-↓-Y, où X = un acide aminé aliphatique, aromatique ou hydrophobe et Y = n′importe quel acide aminé. Lorsqu′elle est présente en large excès et pendant de longues périodes d′incubation, cette enzyme peut dégrader les protéines en acides aminés libres.

La protéinase K est une a sérine protéase ne présentant pas de spécificité prononcée du site de clivage. Elle coupe les protéines entre les acides aminés X et Y (X-↓-Y), où X = un acide aminé aliphatique, aromatique ou hydrophobe et Y = n′importe quel acide aminé. Cette enzyme est extrêmement efficace sur les protéines natives, et peut donc être utilisée pour inactiver rapidement les nucléases endogènes comme les RNases et les DNases.

• Un outil efficace pour la préparation de la matrice. Inactive les DNases et RNases exprimées par la majorité des espèces.
• Qualité et performances constantes. Des tests de qualité stricts garantissent une stabilité optimale et une performance élevée, lot après lot.
• Préparation d′échantillons sur une large gamme de conditions. Cette robuste enzyme est stable dans une vaste plage de pH et est idéale pour diverses applications.
• Enzyme dépourvue de contamination. L′enzyme est testée pour vérifier l′absence de RNases et de DNases, et ne contient essentiellement pas d′ADN. Elle est particulièrement adaptée à l′isolement des matrices de PCR.

Remarque : lorsqu′elle est présente en large excès et pendant de longues périodes d′incubation, cette enzyme peut réduire les protéines en acides aminés libres.

Contenu
La protéinase K lyophilisée de qualité PCR est également disponible en solution.

Pour la recherche en sciences de la vie uniquement. Ne pas utiliser dans des procédures de diagnostic.
La protéinase K lyophilisée de qualité PCR est également disponible en solution.

Activateur : Pour stimuler l′activité de la protéinase K, ajouter des agents dénaturants (SDS et urée). Par exemple, le SDS peut augmenter l′activité de la protéinase K jusqu′à sept fois par rapport à l′activité en son absence.
Solution de travail : Pour des résultats optimaux, dissoudre la protéinase K recombinante de qualité PCR dans de l′eau bidistillée ou du tampon Tris. Le tampon optimal pour la protéinase K dépend de l′application. Les consignes de pH et de températures du champ des paramètres doivent toujours être respectées. En règle générale, la protéinase K est stable et très active dans les tampons contenant des réactifs dénaturants comme l′urée, le dodécylsulfate de sodium (SDS) et les sels de guanidinium.
Conditions de stockage (solution de travail) : -15 à -25 °C

Reconstituer dans de l′eau bidistillée à une concentration minimale de 20 mg/ml

Pefabloc is a registered trademark of Pentapharm