Ribonucléase A from bovine pancreas

La RNase A est un polypeptide monocaténaire composé de 124 acides aminés liés par 4 ponts disulfure. Contrairement à la RNase B, la RNase A n'est pas une glycoprotéine. La RNase A peut être inhibée par l'alkylation du résidu His¹² ou His¹¹⁹ situé au niveau de son site actif. La RNase A peut être activée par les sels de potassium et de sodium.

La RNase A est une endoribonucléase qui attaque le phosphate en 3'-OH d'un nucléotide pyrimidique. La séquence pG-pG-pC-pA-pG est clivée en pG-pG-pCp et en A-pG. Son activité est maximale sur les substrats d'ARN simple brin.

La RNase A, ou ribonucléase A, est une endoribonucléase qui clive les liaisons phosphodiester de l′ARN simple brin après les nucléotides pyrimidiques. Elle attaque l′extrémité phosphate en 3′ (par exemple, la séquence pG-pG-pC-pA-pG est clivée en donnant pG-pG-pCp et A-pG). L′activité est maximale avec l′ARN simple brin. La RNase A est un polypeptide à chaîne unique contenant 4 ponts disulfure. Contrairement à la RNase B, ce n′est pas une glycoprotéine. Les ribonucléases n′hydrolysent pas l′ADN, car celui-ci est dépourvu des groupements 2′-OH essentiels à la formation d′intermédiaires cycliques. La RNase A peut également hydrolyser l′ARN présent dans les échantillons protéiques. Elle peut être inhibée par l′alkylation de His12 et His119 et est activée par les sels de potassium et de sodium. Cette RNase est inhibée en présence d′ions de métaux lourds. Elle est également inhibée par l′ADN par un effet de compétition.

La ribonucléase A de pancréas de bovin a été utilisée :

• pour la purification d'ADN plasmidique
• pour digérer l'ADN double brin et éviter sa coloration lors de la coloration de noyaux
• dans des techniques de détection par immunoperoxydase et par immunofluorescence
• pour traiter des cellules avant cytométrie en flux
• comme constituant d'un tampon post-hybridation pour le lavage de coupes histologiques fixées au formol et incluses en paraffine après hybridation in situ
• pour traiter des cellules lors de la préparation d'extraits de protéines de membrane externe (OMP)
• dans des tests de protection à la RNase
• pour l'élimination d'ARN liés de manière non spécifique
• dans l'analyse de séquences d'ARN
• pour l'hydrolyse de l'ARN contenu dans des échantillons de protéines

Notre ribonucléase A, ou RNase A, d′une grande stabilité, convient à l′élimination d′ARN, au séquençage d′ARN et à la purification d'ADN.

Protéine déterminée par E.

La RNase A peut être activée par les sels de potassium et de sodium. Elle peut être inhibée par l′alkylation de His12 ou His119.

Une application importante de la RNase A est l′élimination de l′ARN présent dans les préparations d′ADN plasmidique. Pour ce faire, de la RNase A exempte de DNases est utilisée à une concentration finale de 10 μg/ml.

Il n′est pas nécessaire de faire bouillir des solutions mères de ce produit de RNase A pour inactiver les DNases résiduelles. Cette ébullition peut faire précipiter la RNase et entraîner une éventuelle perte d′activité enzymatique. Le chauffage d′une solution de RNase A à pH neutre provoque une précipitation. Un chauffage à pH plus bas peut produire une légère précipitation du fait des impuretés protéiques présentes.