Fibroblastes embryonnaires de souris primaires EmbryoMax^®

La gamme de cellules PMEF EmbryoMax offre aux chercheurs une solution pratique pour la culture de CSE, en leur permettant de s'affranchir des étapes chronophages d'isolement et de préparation des cellules nourricières. Bon nombre de protocoles de culture de cellules souches embryonnaires requièrent des fibroblastes embryonnaires de souris primaires, ou cellules PMEF ("primary mouse embryo fibroblast"). Dans ces protocoles, les cellules SE sont habituellement mises en culture sur une monocouche de cellules nourricières du type PMEF. Les cellules nourricières ont deux rôles fondamentaux dans la culture des cellules souches : elles sécrètent dans le milieu environnant plusieurs facteurs de croissance importants qui aident à maintenir la pluripotence, et elles génèrent une matrice cellulaire au sein de laquelle les cellules SE peuvent croître.

Les fibroblastes embryonnaires de souris primaires, résistants à l'hygromycine, souche C57/BL6, ne sont pas traités à la mitomycine C et servent de couche nourricière pour les cellules SE/SPi humaines et de souris. Les cellules MEF sont résistantes à l'hygromycine. Les cellules sont fournies au stade du 3e repiquage et peuvent être encore multipliées avant congélation pour un usage ultérieur.

Mise en culture de cellules nourricières MEF

Procédure :

1. Avant de décongeler les cellules nourricières PMEF, enduire des plaques/fioles de solution de gélatine.
2. Décongeler rapidement un ou plusieurs flacons de PMEF dans un bain-marie à 37 °C puis les transférer dans un tube de 15 ml (contenant déjà 10 ml de milieu pour cellules nourricières PMEF tiède). Retourner doucement le tube et le centrifuger à 300 x g pendant 4 à 5 minutes.
3. Retirer le surnageant et remettre en suspension le culot de cellules dans du milieu pour cellules nourricières tiède.
4. Retirer des plaques/fioles la solution de gélatine, et diviser en aliquotes la suspension de cellules nourricières PMEF selon les densités recommandées dans le Tableau 4.1 du guide des protocoles pour cellules SE de souris.
5. Incuber les cellules nourricières PMEF à 37 °C avec 5 % de CO2. Utiliser les Figures 4A, B et C du guide des protocoles pour cellules SE de souris pour estimer la bonne densité et le
bon aspect des PMEF. Les plaques enduites de gélatine peuvent être utilisées pendant 12 à 14 jours.

Fibroblastes embryonnaires de souris primaires

5-6 x 10⁶ chacun

Les cellules sont fournies sous forme congelée en flacons individuels contenant environ 5-6 x 10⁶ fibroblastes par flacon. Elles sont vendues par boîte de 5 flacons, au stade du 3e repiquage.

Après réception, les flacons doivent être conservés à -80 °C. Pour un stockage de plus de 6 mois, conserver dans une phase vapeur d'azote liquide (veiller à ce que le bouchon soit bien étanche) pendant 2 ans maximum.

EmbryoMax is a registered trademark of Merck KGaA, Darmstadt, Germany