ChiPAb+ trimetil-histona H3 (Lys4): conjunto de anticuerpo y cebador validados para ChIP, monoclonal de conejo

17 kDa

La metilación de las histonas puede ocurrir en dos residuos diferentes: arginina o lisina. La metilación de la histona puede estar asociada con la activación o la represión de la transcripción, dependiendo del residuo metilado. La lisina 4 de la histona H3 puede puede estar mono, di o trimetilada por diferentes histona metiltransferasas (HMT) como la SET1 o la ASH1. La metilación de la Lys4 se asocia a menudo con la activación transcripcional. La desmetilasa LSD1 es capaz de desmetilar la histona H3 Lys4.

Todos los anticuerpos ChiPAb+ se validan individualmente para la precipitación de cromatina, en cada lote y en todo momento. Cada conjunto de anticuerpos ChiPAb+ incluye cebadores de control (probados en cada lote mediante qPCR) para validar biológicamente los resultados de IP en un contexto específico de locus. Se proporcionan el protocolo de qPCR y las secuencias de los cebadores, lo que permite a los investigadores validar los protocolos de ChIP al utilizar nuestro anticuerpo en su contexto de cromatina. Cada conjunto incluye también un anticuerpo de control negativo para garantizar la especificidad de la reacción de ChIP.
El conjunto de ChiPAb+ trimetil-histona H3 (Lys4) incluye el anticuerpo anti-trimetil-histona H3 (Lys4), un anticuerpo de control negativo (suero de conejo normal) y cebadores de qPCR que amplifican una región de 166 pares de bases dentro del promotor del gen GAPDH humano. Los anticuerpos anti-trimetil-histona H3 (Lys4) y controles negativos se suministran en un tamaño de reacción escalable «por ChIP» y pueden utilizarse para validar funcionalmente la precipitación de la cromatina asociada a la trimetil-histona H3 (Lys4).

El anticuerpo anti-trimetil-histona H3 (Lys4) se elabora contra un péptido sintético que contiene la secuencia …RT[me3K]QT…, en la que me3K corresponde a la trimetil-lisina 4 de la histona humana H3, conjugado con BSA

Epítopo: Trimetil Lys4

Inmunoprecipitación de la cromatina:
La cromatina tratada con ultrasonidos a partir de células U2OS (3 X 10⁶ equivalentes de células por IP) tratadas con UV (6 h, 50 julios/m2) o no tratadas se sometió a inmunoprecipitación utilizando 3 μl de anticuerpo de conejo anti-trimetilhistona H3 (Lys4) y el kit Magna Chip A (referencia 17-610). La inmunoprecipitación de fragmentos de ADN asociados a trimetil histona H3 (Lys4) se verificó mediante qPCR utilizando cebadores p21 para ChIP que flanquean el promotor p21 humano que contiene un sitio de unión a SP1 (consulte las figuras).
Las veces que aumenta es una proporción de las cantidades medias de IP normalizadas extraídas de las curvas patrón derivadas de la información de cada muestra de cromatina. La actividad trimetil-histona (Lys4) inmunoprecipitable asociada con este promotor aumenta con el tratamiento UV como se observó en otros estudios.
Consulte los detalles experimentales en el protocolo EZ-Magna A CHIP (Nº de ref. 17-408) o EZ-CHIP (Nº de ref. 17-371) .

Análisis de Chip-Seq:
La inmunoprecipitación de la cromatina se realizó usando el kit Magna ChIP HiSens (17-10460), 3 µl de anticuerpo anti-trimetil-histona H3 (Lys4) (Nº de ref. 17-614) o 20 µl de microesferas de proteína A/G, y cromatina de células HeLa entrecruzada 1e6 seguida de purificación de ADN con microesferas magnéticas. Los bancos se prepararon a partir de muestras de ADN de entrada y ChIP utilizando protocolos estándar con adaptadores con código de barras Illumina y se analizaron en el instrumento Illumina HiSeq. Se cartografió un exceso de dieciocho millones de lecturas de archivos FastQ utilizando Bowtie (http://bowtie-bio.sourceforge.net/manual.shtml) siguiendo la eliminación de etiquetas TagDust (http://genome.gsc.riken.jp/osc/english/dataresource/). Los picos se identificaron mediante MACS (http://luelab.dfci.harvard.edu/MACS/), y los picos y las lecturas se visualizaron como una pista personalizada en el navegador genómico UCSC (http://genome.ucsc.edu) de archivos Bigwig y BED. El 25 % más alto de los picos identificados en los conjuntos de datos 17-614 y 07-473 demostró un solapamiento del 99 % con los picos identificados en la pista ENCODE H3K4me3 BROAD histona para HeLa S3.

Análisis mediante inmunoelectrotransferencia e inhibición de péptidos:
Inmunotransferencia representativa. El extracto ácido de HeLa se resolvió por electroforesis, se transfirió a nitrocelulosa y se probó con anti-trimetilhistona H3 (Lys4) (1:2 000, carril 1) o se preincubó con péptido histona H3 0,4 μM con las siguientes modificaciones carril 2: monometil-lisina 4, carril 3: dimetil lisina 4, carril 4: trimetil-lisina 4.
Las proteínas se visualizaron utilizando un anticuerpo secundario de cabra anti-conejo conjugado con HRP y un sistema de detección de quimioluminiscencia
(consulte las figuras).

Categoría de investigación
Epigenética y función nuclear

Juego de anticuerpos y cebadores validados para ChIP trimetil-histona H3 (Lys4), que incluye el anticuerpo de calidad ChIP y los cebadores específicos de control de PCR utilizados para la inmunoprecipitación de la cromatina de H3K4Me3.

Subcategoría de investigación
Biología de la cromatina

Trimetil-histona H3 (Lys4)

25 análisis por kit, ~3 μl por inmunoprecipitación de cromatina

IgG monoclonal de conejo recombinante anti-trimetil-histona H3 (Lys4). Un vial que contiene 75 μl de IgG de conejo purificada en proteína A en tampón de almacenamiento (Tris-glicina 0,1 M pH 7,4, NaCl 0,15 M, NaN3 al 0,05 %, con la adición de glicerol al 40 %.

IgG de conejo sano. Un vial que contiene 75 μl de IgG de conejo sano.

Cebadores control. Un vial que contiene 75 μl de 5 μM de cada cebador específico para la GAPDH humana (DIR). TAC TAG CGG TTT TAC GGG CG
INV: TCG AAC AGG AGG AGC AGA GAG CGA

Presentación: Purificada

Estable durante 1 año a -20°C desde la fecha de recepción.

Control
incluyó IgG de conejo purificada de control negativo y cebadores de control específicos para el promotor de GAPDH humano.

Inmunoprecipitación de la cromatina:
La cromatina tratada con ultrasonidos preparada partir de células HeLa no tratadas (1 X 10⁶ equivalentes de células) se sometió a inmunoprecipitación utilizando 3 μl de IgG de conejo normal o 3 μl de IgG monoclonal anti-trimetilhistona H3 (Lys4) y el kit Magna ChIP A (Nº de ref. 17-610). La inmunoprecipitación exitosa de fragmentos de ADN asociados a la
trimetil-histona H3 (Lys4) se verificó mediante qPCR utilizando cebadores ChIP de control que flanqueaban al promotor GAPDH humano (consulte las figuras). Consulte los detalles experimentales en el protocolo EZ-Magna A ChIP.

Anti-trimetilhistona H3 (Lys4) (IgG de conejo purificada), 1 vial

IgG de conejo control ChIP negativo, 1 vial

Cebadores ChIP para GAPDH, 1 vial

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