Benzonase^® Nuclease

La nucleasa Benzonase^® es una endonucleasa genotecnológica producida a partir de Serratia marcescens. Degrada todas las formas de ADN y ARN (monocatenarias, bicatenarias, lineales y circulares) pero no tiene actividad proteolítica. Es eficaz en muchas condiciones diversas y posee una actividad específica excepcionalmente elevada. La enzima digiere por completo los ácidos nucleicos a oligonucleótidos de 2 a 5 bases de longitud (por debajo del límite de hibridación) terminados en 5′-monofosfato, lo que es ideal para separar los ácidos nucleicos de las proteínas recombinantes y permite el cumplimiento de las directrices de la FDA sobre contaminación de ácidos nucleicos. La capacidad de Benzonase para hidrolizar rápidamente los ácidos nucleicos hace de la enzima una opción excelente para reducir la viscosidad y el tiempo de procesamiento, y aumentar el rendimiento proteico. Por ejemplo, la enzima es compatible con los reactivos de extracción de proteínas BugBuster y PopCulture y puede por tanto añadirse junto con esos reactivos para eliminar la viscosidad y quitar los ácidos nucleicos de extractos de E. coli.

La enzima consta de dos subunidades de 30 kDa cada una. Es funcional a un pH comprendido entre 6 y 10, y entre 0 y 42°C; además requiere Mg²⁺ 1-2mM para activación. La enzima es también activa en presencia de detergentes iónicos y no iónicos, agentes reductores, PMSF (1 mM), EDTA (1 mM) y urea (su actividad relativa depende de las condiciones específicas). Su actividad es inhibida por cationes monovalentes > 150 mM, fosfato > 100 mM, sulfato de amonio > 100 mM o HCl de guanidina >100 mM.

La nucleasa Benzonase está disponible en calidades ultrapura (>99 % mediante SDS-PAGE) y pura (>90 %) a una concentración estándar de 25 - 29 U/µl y a una concentración elevada (HC) de 250 U/µl. Ambas preparaciones están exentas de proteasas detectables y tienen una actividad específica > 1 × 10⁶ U/mg de proteínas. El grado de pureza >99 % se ha probado para endotoxinas y contiene <0.25 EU/1000 units. The product is suppliedin 50% glycerol.Store at -20°C.

Total endotoxin:<0.25 EU/1,000 units.Purity: >90 % mediante SDS-PAGE

Utilizado para eliminación de los ácidos nucleicos de las muestras proteicas.

Digiere el ADN y el ARN nativos o desnaturalizados por calor.

Una unidad se define como la cantidad de enzima que causa un ΔA₂₆₀ de 1,0 en 30 minutos, lo que corresponde a la digestión completa de 37 µg de ADN.

Benzonase is a registered trademark of Merck KGaA, Darmstadt, Germany

NOVAGEN is a registered trademark of Merck KGaA, Darmstadt, Germany

Toxicidad: Manipulación estándar (A)