Proteína LIF recombinante de ratón ESGRO^®

El factor inhibidor de la leucemia de ratón (LIF, mLIF) promueve la autorrenovación y el mantenimiento prolongado de las células madre embrionarias pluripotentes de ratón (ES) y las células madre pluripotentes inducidas (iPS) mediante la supresión de la diferenciación espontánea.

El suplemento de medio LIF de ratón ESGRO se suministra en unidades activas/ml para un rendimiento uniforme entre lotes. Cada lote de suplemento ESGRO es sometido a estrictas pruebas de control de calidad para asegurar la inhibición fiable de la diferenciación de las células madre pluripotentes de ratón. El suplemento LIF de ratón ESGRO puede utilizarse para cultivo de células madre embrionarias de ratón (ES) y células madre pluripotentes inducidas (iPS) con células nutritivas y sin ellas.

Entre las aplicaciones para el suplemento ESGRO se cuenta su utilización como reactivo para el mantenimiento in vitro del fenotipo pluripotencial de las células madre embrionarias de ratón.

PROTOCOLOS SUGERIDOS:

Células madre embrionarias: En cultivos de células madre embrionarias pluripotenciales DE3 y MBL-1 suele observarse la necesidad de de 1000 U de suplemento ESGRO por 1,0 ml de medios de cultivo de tejido para mantener las células madre embrionarias con un fenotipo de célula madre. Se han utilizado también concentraciones similares de mLIF para la transmisión en la línea germinal de células madre embrionarias alteradas genéticamente (E3) en la línea germinal.

A la concentración recomendada, 10⁷ unidades de ESCRO son suficientes para 10,0 l de medio de cultivo tisular y 10⁶ unidades de suplemento ESGRO lo son para 1,0 l de medios de cultivo de tejido.

El suplemento ESGRO se suministra en forma líquida como 10⁷ unidades en 1,0 ml de disolución salina tamponada con fosfato con seroalbúmina bovina (BSA) al 1% p/v como transportador para estabilidad.

Presentación: Purificado

El suplemento ESGRO^® se suministra esterilizado por filtración a través de 0,22 micras y negativo en las pruebas de micoplasmas.

El suplemento ESGRO se transporta a temperatura ambiente. Puede incluirse una compresa fría para las relaciones con el cliente, aunque no es verdaderamente necesaria. Se han realizado extensas pruebas de estabilidad con el suplemento ESGRO durante el desarrollo. Este producto es estable al menos durante 18 meses a partir de la fecha de fabricación, en la forma concentrada o diluida en medios de cultivo de tejido estériles, sin pérdida de actividad de las células madre embrionarias. Para su conservación a largo plazo, se recomienda que el suplemento ESGRO se conserve a 4°C. La congelación-descongelación reducirá la potencia. Antes del uso del suplemento ERGO se recomienda su dilución en medio de cultivo de tejido estéril y su división en alícuotas a una concentración conveniente, que luego se conserve a 4°C. La congelación-descongelación debe evitarse. El producto es estable durante un mínimo de 7 días en incubadora de CO2 al 5 % a 37°C durante el cultivo de las células ES.

Actividad específica: El suplemento ESGRO^® se valora en células madre embrionarias de ratón (D3 & MBL-1) y en células de leucemia mieloide M1 murina(4). Un patrón de 50 unidades se define como la concentración de suplemento ESGRO, en 1,0 ml de medio de cultivo de tejido, que induce la diferenciación del 50 % de las colonias M1(4) 10E7 unidades equivalen a aproximadamente 100 μg de proteína pura, y es suficiente para tratar 10 l de medios de cultivo de células madre embrionarias.

Ensayos con células madre embrionarias: Inhibición de la diferenciación a 1000 unidades/ml leucemia mieloide murina, valoración M1: Actividad específica>/= 10⁸ unidades/ mg

CHEMICON is a registered trademark of Merck KGaA, Darmstadt, Germany

ESGRO is a registered trademark of Merck KGaA, Darmstadt, Germany