Anticuerpo anti-puromicina, clon 12D10

La puromicina es un antibiótico aminonucleósido procedente de la bacteria Streptomyces alboniger, que actúa como un inhibidor de la síntesis de proteínas al bloquear la traducción mediante la terminación prematura de la cadena en el ribosoma. Los anticuerpos monoclonales contra la puromicina pueden utilizarse con métodos inmunoquímicos convencionales para controlar directamente la traducción, un método que se conoce como surface sensing of translation (SUnSET). Parte de la molécula se parece al extremo 3′ del ARNt aminoacilado, lo que hace que sea útil para el análisis de la traducción de proteínas. La puromicina induce la fragmentación del ADN en los timocitos y en las células de leucemia humana HL-60.

La puromicina se incorpora en las proteínas neosintetizadas Sólo en presencia de puromicina, este anticuerpo detecta las proteínas neosintetizadas de múltiples pesos moleculares con puromicina incorporada. Sin embargo, se observa una señal más débil cuando también está presente la cicloheximida, un inhibidor de la biosíntesis de proteínas en los eucariotas.

Puromicina de Streptomyces alboniger

Análisis de inmunotransferencia Western (tinción de proteínas totales): Los lisados de células HEK293 tratadas con puromicina y cicloheximida o sólo con puromicina se resolvieron utilizando SDS-PAGE y se transfirieron a una membrana. Las proteínas se visualizaron utilizando la tinción Ponceau S.

Análisis mediante inmunocitoquímica: En una dilución 1:10 000 de un lote representativo se detectaron proteínas neosintetizadas con puromicina incorporada en los lisados de células HeLa tratados con puromicina.

Análisis mediante inmunoelectrotransferencia: En un lote representativo se detectaron proteínas neosintetizadas con puromicina incorporada en el Western blot (Reineke, L. C., et al. (2012). Mol Biol Cell. 23(18):3499-3510.; Trinh, M. A. et al. (2012). Cell Rep. 1(6):678-688.; Fortin, D. A., et al. (2012). J Neurosci. 32(24):8127-8137.; Clavarino, G., et al. (2012). PLoS Pathog. 8(5):e1002708.; David, A., et al. (2012). J Cell Biol. 197(1):45-57.; White, L. K., et al. (2011). J Virol. 85(1):606-620.; Hoeffer, C. A., et al. (2011). Proc Natl Acad Sci USA. 108(8):3383-3388.; Goodman, C. A., et al. (2010). FASEB J. 25(3):1028-1039.; Schmidt, E., K., et al. (2009). Nat Methods. 6(4):275-277.; Santini, E., et al. (2013). Nature. 493(7432):411-415.; Quy. P. N., et al. (2013). J Biol Chem. 288(2):1125-1134.; Hulmi. J. J., et al. (2012). Am J Physiol Endocrinol Metab. 304(1):E41-50.; Bhattacharya, A., et al. (2012). Neuron. 76(2):325-337.; Hoeffer, C. A., et al. (2013). J Neurophysiol. 109(1):68-76.).

Análisis mediante inmunofluorescencia: En un lote representativo se detectaron proteínas neosintetizadas con puromicina incorporada en el Western blot (Reineke, L. C., et al. (2012). Mol Biol Cell. 23(18):3499-3510.; Trinh, M. A. et al. (2012). Cell Rep. 1(6):678-688.; Fortin, D. A., et al. (2012). J Neurosci. 32(24):8127-8137.;David, A., et al. (2012). J Cell Biol. 197(1):45-57.; David, A., et al. (2011). J Biol Chem. 286(23):20688-20700.; White, L. K., et al. (2011). J Virol. 85(1):606-620.; Hoeffer, C. A., et al. (2011). Proc Natl Acad Sci USA. 108(8):3383-3388.; Schmidt, E., K., et al. (2009). Nat Methods. 6(4):275-277.; Goodman, C. A., et al. (2012). Proc Natl Acad Sci USA. 109(17):E989.; Santini, E., et al. (2013). Nature. 493(7432):411-415.; Quy. P. N., et al. (2013). J Biol Chem. 288(2):1125-1134.).

Análisis mediante inmunohistoquímica: En un lote representativo se detectaron proteínas neosintetizadas con puromicina incorporada en IHC (Goodman, C. A., et al. (2010). FASEB J. 25(3):1028-1039.).

Análisis de clasificación de células activadas por fluorescencia: En un lote representativo se detectaron proteínas neosintetizadas con puromicina incorporada en el FACS (David, A., et al. (2012). J Cell Biol. 197(1):45-57.; Schmidt, E., K., et al. (2009). Nat Methods. 6(4):275-277.).

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Categoría investigación
Epigenética y función nuclear

El anticuerpo anti-puromicina, clon 12D10, detecta la puromicina incorporada en proteínas. Los anticuerpos monoclonales contra la puromicina pueden utilizarse con métodos inmunoquímicos convencionales.

Subcategoría investigación
Proteínas de unión y metabolismo del ARN

Anticuerpo anti-puromicina, clon 12D10, demostró reaccionar con la muestra problema humana, preincubada con puromicina. Se prevé que reaccionará con todas las especies cuando la muestra problema se incube con puromicina.

IgG2bκ monoclonal de ratón purificada en tampón que contiene Tris-glicina 0,1 M (pH 7,4), NaCl 150 mM con acida sódica al 0,05%.

Presentación: Purificada

Proteína G purificada

Estable durante 1 año a 2-8°C desde la fecha de recepción.

Control
Lisados de células HEK293 tratados con puromicina y cicloheximida o con puromicina sólo

Evaluado mediante inmunoelectrotransferencia (western blot) en lisados de células HEK293 tratados con puromicina y cicloheximida o sólo con puromicina.

Análisis mediante inmunoelectrotransferencia: Una dilución 1:25 000 de este anticuerpo detectó a las proteínas neosintetizadas con puromicina incorporada en los lisados de células HEK293 tratados sólo con puromicina. Este anticuerpo detectó también pequeñas cantidades de proteínas neosintetizadas con puromicina incorporada en las células HEK293 tratadas con puromicina y ciclohexamida.

Concentración: Para conocer la concentración específica del lote, consulte el certificado de análisis.

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