cOmplete^™, combinación de inhibidores de proteasas sin EDTA

Rendimiento probado con extracto pancreático.

Completo^™, el conjunto de inhibidores de proteasas sin EDTA se ha utilizado como componente en

• el tampón de lisis para la lisis de células renales embrionarias humanas transfectadas (HEK293T) y en el tampón de lisis del ensayo de radioinmunoprecipitación (RIPA) para la homogeneización del embrión de pez cebra
• el reactivo de extracción de proteínas tisulares (T-PER) para la homogeneización del tejido de hipocampo
• el tampón de lisis dodecilsulfato sódico (SDS) para la lisis de hepatocitos

cOmplete^™, sin EDTA, inhibe con eficacia las proteasas de serina y de cisteína en extractos bacterianos, de levaduras y de células vegetales y animales. Las metaloproteasas y aspartil proteasas no se inhiben.
Los comprimidos cOmplete sin EDTA se utilizan para la inhibición de la actividad proteolítica en volúmenes grandes (hasta 50 ml) en los que el EDTA puede interferir en la estabilidad de las proteínas (por ejemplo, proteínas que contienen un metal) o en los ensayos posteriores. Dado que el EDTA interfiere en la IMAC (cromatografía por afinidad con metal inmovilizado), cOmplete sin EDTA se utiliza de preferencia en el proceso de aislamiento de proteínas de fusión con etiquetas Poli-His.
Si es necesario inhibir la actividad proteolítica en un volumen menor (hasta 10ml), recomendamos utilizar cOmplete, Mini, sin EDTA.

Se añadió un comprimido cOmplete sin EDTA por cada 50 ml de disolución de incubación. La actividad proteolítica se determinó con el sustrato de proteasa universal de Roche (caseína, marcada con resorufina). Si son necesarias extracciones o aislamientos en un solo paso en el intervalo de pH ácido, basta con que incluya pepstatina junto con los comprimidos cOmplete sin EDTA para garantizar la inhibición de las proteasas del (ácido) aspártico. Todos los experimentos se realizaron entre +15 y +25°C.

Mezcla de diversos inhibidores de proteasas. Para la inhibición de proteasas de serina y de cisteína, pero no de metaloproteasas

Utilice los comprimidos de inhibidores de proteasas cOmplete para proteger sus proteínas de una gran variedad de proteasas. En solo unos minutos, la actividad proteolítica desinhibida puede degradar la proteína que se ha tardado días en aislar. Cada uno de estos cómodos comprimidos hidrosolubles contiene una mezcla de inhibidores de proteasas que inhiben la actividad proteolítica en la mayor parte de tipos celulares: animales, vegetales, levaduras y bacterias. No es necesario pesar ni medir, lo que garantiza resultados uniformes.

• Comodidad: Sólo tiene que empujar el comprimido de disolución rápida a través del embalaje de aluminio del EASYpack hasta el tampón.
• Protección completa: Protección instantánea de sus proteínas frente a una amplia gama de proteasas.
• Flexibilidad: Protección de las proteínas de extractos de casi cualquier tejido o célula: animales, vegetales, levaduras, bacterias u hongos.
• Seguridad: Elija inhibidores no tóxicos que no le planteen riesgos a usted ni a quienes le rodean.
• Idoneidad para purificación mediante cromatografía por afinidad con metal inmovilizado (IMAC): purificación de proteínas etiquetadas con poli-histidina con una resina de purificación cOmplete con la etiqueta His.

Los comprimidos de inhibidores de proteasa sin EDTA, cOmplete, inhiben un amplio espectro de serín y cisteín proteasas. Al contrario que otros comprimidos cOmplete, no contienen EDTA, ni otros  quelantes por ejemplo EGTA, lo que hace que no se vea afectada la estabilidad ni la función de las proteínas dependientes de metales. También se facilita la purificación por afinidad de las proteínas de fusión con etiquetas Poli-Hi utilizando IMAC (cromatografía por afinidad con metal inmovilizado) (no se necesita diálisis).
Debido a la composición optimizada de los comprimidos, demuestran excelentes efectos inhibidores y son ideales para la protección de proteínas aisladas de tejidos animales y vegetales, de levaduras y de bacterias. Los comprimidos cOmplete sin EDTA contienen inhibidores de proteasas reversibles e irreversibles. Las metaloproteasas y las aspartil proteasas no se inhiben.

Los comprimidos cOmplete sin EDTA son idénticos a los comprimidos cOmplete. La única diferencia es que no contienen EDTA ni otros quelantes (por ejemplo EGTA).

Mezcla patentada de diversos inhibidores de proteasas con amplia especificidad inhibidora.

Sólo para investigación en ciencias de la vida. No indicada para procedimientos de diagnóstico.

20 Comprimidos de cóctel de inhibidores de proteasas cOmplete envasados individualmente en blísteres de aluminio.

Comprimidos en envases blíster de aluminio

Concentración de trabajo: 1 comprimido por 50 ml de disolución de extracción
Disolución de trabajo: Manipulación

Empuje con cuidado el comprimido a través del envase de aluminio utilizando la base del pulgar (no la uña) para evitar que se rompan los comprimidos.

Preparación de la disolución de trabajo

Un comprimido cOmplete sin EDTA es suficiente para inhibir la actividad proteolítica en 50 ml de disolución de extracción. Cuando haya mucha actividad proteolítica, deberá utilizarse un comprimido por 25 ml de tampón de extracción. Los comprimidos pueden añadirse directamente al medio de extracción. Otra posibilidad es preparar una disolución de reserva (concentración x 25).

Preparación de la disolución de reserva (concentración x 25)

Disolver un comprimido de cOmplete sin EDTA en 2 ml de agua destilada o en 2 ml de tampón fosfato 100 mM, pH 7,0.
Condiciones de almacenamiento (disolución de trabajo): La disolución de trabajo puede conservarse entre 2 y 8 °C durante1 a 2 semanas, o al menos 12 semanas entre -15 y -25 °C.

Conservar entre 2 y 8 °C. (También es posible el almacenamiento entre -15 y -25 °C)

Solubles en disoluciones tampones acuosas; o añadir directamente a los medios de extracción. Otra alternativa es preparar disoluciones de reserva 25x en 2 ml de agua o de tampón fosfato 100 mM, pH 7,0. La disolución de reserva es estable durante 1-2 semanas entre 2 y 8 °C o al menos 12 semanas ente -15 y -25 °C; puede utilizarse en disoluciones que contengan tiol entre 15 y 25 °C.

cOmplete is a trademark of Roche