Kit de preparación de la plantilla para la PCR de gran pureza

Aislamiento de bajo a medio rendimiento del ADN genómico.

Kit de preparación de la plantilla para PCR de gran pureza; Instrucciones de uso

Los ácidos nucleicos se unen a la superficie de la lana de fibra de vidrio en presencia de una sal caotrópica (CHl de guanidina). Esto permite al tubo de filtración High Pure inmovilizar específicamente los ácidos nucleicos (ADN y ARN) mientras están libres de contaminantes.

Nota: Se incluye un tampón eliminador del inhibidor especial que permite el uso de material de muestra heparinizado (100 U/ml de heparina). Esta disolución tampón aumenta la sensibilidad y la reproducibilidad de los análisis realizados con el ácido nucleico aislado, aunque la muestra contenga heparina.

Capacidad: Los tubos de filtro High Pure Spin contienen un volumen de muestra de hasta 700 μl.

El kit de preparación de la muestra para PCR de gran pureza purifica los ácidos nucleicos a partir de una amplia variedad de materiales de muestra, como sangre completa, células cultivadas y tejido. Los ácidos nucleicos aislados pueden utilizarse para:

• PCR de plantilla larga
• PCR cuantitativa en tiempo real
• Detección de SNP
• Transferencia Southern
• Clonación

El kit de preparación de la muestra para PCR de gran pureza se ha utilizado en la extracción del ADN genómico a partir de muestras de sangre completa, muestras de lesión cervical, tejido de la mucosa gástrica y líneas celulares de carcinoma cervical.

Las células sanguíneas o el tejido se lisan mediante una breve incubación con un tampón de lisis especial y proteinasa K en presencia de una sal caotrópica como el HCl de guanidina, que inactiva inmediatamente todas las nucleasas. Los ácidos nucleicos celulares se unen selectivamente a fibras de vidrio especiales precargadas en el tubo High Pure Purification Filter. El ácido nucleico ligado se purifica en una serie de pasos de lavado y centrifugado rápidos para eliminar los componentes celulares contaminantes. Por último, una elución con poca sal libera el ácido nucleico de la fibra de vidrio. Con este sencillo método se elimina la necesidad de extracciones con disolvente orgánico y precipitación del ADN, permitiendo la purificación rápida de muchas muestras a la vez.

El kit de preparación de la muestra para PCR de gran pureza purifica los ácidos nucleicos a partir de una amplia variedad de materiales de muestra, como sangre completa, células cultivadas y muestras de tejido. Las bacterias y las levaduras requieren un tratamiento prelisis específico con lisozima o liticasa.

• Minimiza la pérdida de ADN utilizando un kit que elimine los contaminantes sin precipitación u otras etapas de manipulación que degradan el ADN.
• Recupera ADN de peso molecular elevado (de 30 a 50 kb) que es adecuado para la PCR de plantilla larga.
• Mejora la fiabilidad y la reproducibilidad en las aplicaciones posteriores (PCR cuantitativa en tiempo real).
• Ahorra tiempo y maximiza la flexibilidad al preparar simultáneamente plantillas múltiples de PCR.
• Elimina el uso de compuestos orgánicos peligrosos como el cloruro de cesio, el fenol, el cloroformo y el bromuro de etidio.

El ADN se aísla a partir de 25 mg de timo de ternero, 1 x 10⁶ células K562 y 200 μl de sangre completa en EDTA. El rendimiento se mide mediante OD para las muestras de tejido y celulares. La calidad de los ácidos nucleicos se controla en una PCR de largo alcance Expand con un producto de amplificación de 9,3 kb para el ADN procedente de las células. La PCR en un equipo LightCycler^® se realiza en muestras de sangre humana para investigación utilizando los kits para el factor V Leiden y la CycA.

LightCycler is a registered trademark of Roche