Colagenasa B

La colagenasa B se prepara a partir de cultivos de Clostridium histolyticum mediante filtración, precipitación en sulfato de amonio, diálisis y liofilización. La colagenasa de Clostridium histolyticum es una enzima colagenolítica. Interactúa con sustancias parecidas al colágeno y es responsable de la degradación del colágeno en péptidos pequeños. Se utiliza ampliamente para la desagregación de muchos tipos de tejidos (por ejemplo, pulmón, corazón, músculo, hueso, tejido adiposo, hígado, riñón, cartílago, glándula mamaria, placenta, vasos sanguíneos, cerebro, tumores) y para la preparación de suspensiones monocelulares para el establecimiento de sistemas de cultivo celular primario. Se recomienda la colagenasa B cuando el rendimiento, la viabilidad son importantes.

La colagenasa de Clostridium de Roche se ha utilizado para preparar células de muchos tipos de tejido, como hepatocitos, adipocitos, islotes pancreáticos, células epiteliales, células musculares, células endoteliales, etc.. Sin embargo, debe determinarse empíricamente la idoneidad de cada lote de la enzima para la ruptura de un tejido concreto.
La colagenasa B se ha utilizado para la preparación de células procedentes de aortas de ratón y de tejido de cáncer colorrectal.

La colagenasa degrada el colágeno nativo. La clostripaína, las enzimas tripsinoides y las proteasas neutras degradan también otras proteínas.

Actividad enzimática:
Actividad de la colagenasa: >0,15 U/mg (según Wünsch) (+25°C, 4-fenilazobenciloxicarbonil-Pro-Leu-Gly-Pro-D-Arg como sustrato)
Actividades enzimáticas contaminantes: tripsina, clostripaína y actividad proteolítica total
La colagenasa B tiene una actividad colagenasa de normal a elevada y una actividad clostripaína superior a la media (normalmente >10 unidades/mg).

Inhibidores:
Inhibidores de la colagenasa: EDTA, EGTA, Cys, His, DTT, 2-mercaptoetanol
El suero no inhibe la colagenasa.
Inhibidores de la clostripaína: TLCK
Inhibidores de la tripsina: aprotinina, inhibidor de tripsina (clara de huevo, soja)

Activador: Ca²⁺
Concentración de trabajo: de 0,5 a 2,5 mg/ml
Condiciones de almacenamiento (disolución de trabajo): entre -15 y -25 °C
Roche recomienda reconstituir sólo la cantidad de liofilizado necesario para uso inmediato. La disolución reconstituida puede conservarse entre -15 y -25 °C durante un máximo de una semana. Evite la congelación y descongelación repetidas ya que la actividad disminuye después de la reconstitución.

Reconstitución en cualquier disolución salina equilibrada (por ejemplo, HBSS)

La colagenasa de Roche se valora en unidades Wünsch (1 μmol de producto formado por minuto a +25 °C con sustrato Wünsch).
A menudo, las actividades colagenasa se dan en unidades Mandl (1 μl de leucina liberada del colágeno en 5 horas a +37 °C).
Por desgracia, no hay un factor de conversión uniforme entre las dos unidades de actividad, ya que la unidad Mandl depende en parte de la concentración de las proteasas contaminantes en la preparación de colagenasa, una variable indefinible. Una preparación de colagenasa más pura daría de hecho una menor actividad específica en unidades Mandl que una preparación bruta. Las preparaciones de Clostridium dan normalmente factores de conversión de aproximadamente 1:1800 (por ejemplo, un lote concreto de colagenasa de Clostridium contenía aproximadamente 0,15 U Wünsch/mg y 250 U Mandl/mg).

Sólo para investigación en ciencias de la vida. No indicada para procedimientos de diagnóstico.