Pepstatina A

La pepstatina A es un inhibidor de las proteasas ácidas (aspartil peptidasas). Forma un complejo 1:1 con proteasas como la pepsina, la renina, la catepsina D, la quimosina bovina y la proteasa B (Aspergillus niger). El inhibidor es muy selectivo y no inhibe las tiol proteasas, las proteasas neutras ni las serín-proteasas. La γ-secretasa solubilizada y la proteasa retroviral son también inhibidas por la pepstatina A. Se ha utilizado para caracterizar proteasas de diversas procedencias.

Potente inhibidor de las proteasas ácidas: la pepsina, la renina y la catepsina D, así como muchas proteasas de aspártico microbianas. Concentración efectiva 1 μM. Estable durante aprox. 1 día.

La pepstatina puede disolverse a 1 mg/ml en ácido acético al 10 % (v/v) en metanol (9:1 metanol:ácido acético). Puede ser necesario añadir ácido acético para disolver este péptido en metanol o DMSO. Se ha disuelto a 1 - 2 mg/ml en etanol, pero puede requerirse calor para la disolución completa. Las disoluciones de pepstatina A pueden calentarse hasta 60 °C sin que se descomponga el péptido.
Las disoluciones de reserva a 1 mg/ml son estables por lo menos durante una semana a 4 °C. Una disolución 1 mM en metanol o DMSO es estable durante meses a -20 °C. Si las disoluciones se vuelven de color amarillo oscuros, el reactivo se está hidrolizando.
Una concentración de trabajo de 1 μM es estable durante como mínimo un día a temperatura ambiente.

Pepstatin A is suitable for use:

• in the inhibitor cocktail in fluorometric matrix metalloproteinase assay
• as a protease inhibitor during homogenization of tissue
• as a protease inhibitor during extraction of cells
• to determine the molar concentrations of cathepsin D by titration with pepstatin A
• in inhibiting cathepsin D

It can be used in conjunction with E64-d and Leupeptin A to inhibit the degradation of autophagic cargo inside autophagosomes. For this application, the working concentration is typically between 1-10 μM.

1 U corresponds to the amount of inhibitor which reduces the activity of pepsin by 1 U (1 U corresponds to the amount of enzyme which increases the absorbance at 280 nm by 0.001 per minute at pH 2.0 and 37°C (Hemoglobin, Cat. No. 51290, as substrate, in an endvolume of 16 ml)); 10′000 absorbance-U as described above are equivalent to ∼1 Bergmeyer-U (when 1 pepsin-U is the amount of enzyme which hydrolyzes 1 μmol acetyl-L-phenylalanyl-3,5-diiodo-L-tyrosin per minute at pH 2.0 and 37°C)

Strong inhibitor of acid proteases - pepsin, cathepsin D, renin