Colagenasa from Clostridium histolyticum

La colagenasa puede utilizarse:

• para la preparación de tejido arterial para el estudio de los productos finales de la glucosilación avanzada (AGE)
• para utilizarse junto con otras proteasas para la disgregación de tumores humanos, riñón de ratón, cerebro humano, epitelio pulmonar y muchos otros tejidos.
• en los estudios de perfusión de hígado y riñón, de digestión del páncreas y de aislamiento de hepatocitos no parenquimatosos
• para la preparación de hepatocitos viables a partir del hígado de rata y para el aislamiento de células grasas del tejido adiposo de rata.

La colagenasa es activada por cuatro átomo-gramos de calcio por mol de enzima. Es inhibida por el ácido etilenglicol-bis(beta-aminoetil éter) - N, N, N′,N′-tetraacético, el beta-mercaptoetanol, el glutatión, el ácido tioglicólico y la 8-hidroxiquinolina.

La colagenasa es activada por cuatro átomo-gramos de calcio por mol de enzima. Es inhibida por el ácido etilenglicol-bis(β-aminoetill éter) - N, N, N′,N′-tetraacético, el β-mercaptoetanol, el glutatión, el ácido tioglicólico y la 8-hidroxiquinolina. Las enzimas colagenasa y proteasa neutra desempeñan un papel importante en la liberación efectiva de las células de los tejidos. La colagenasa reconoce la secuencia -R-Pro-8-X-Gly-Pro-R-, donde X es más a menudo un aminoácido neutro.

Tal como se suministra, este producto es estable durante un año a -20°C. No hay pérdida de actividad FALGPA ni actividad proteasa en 30 días a 37°C, 50°C y -20°C. Las disoluciones de colagenasa cruda son estables si se congelan rápidamente en alícuotas (a 10 mg/ml) y se conservan congeladas a -20°C. Otros ciclos de congelación-descongelación dañarán la disolución. El producto retiene el 100 % de su actividad durante 7 horas si se conserva en hielo.

Clostridium histolyticum es un clostridio patógeno que produce colagenasas. Ésta es una mezcla de enzimas que contienen colagenasa, proteasas inespecíficas y clostripaína.

Una unidad de digestión de colágeno (CDU) libera péptidos del colágeno del tendón de Aquiles bovino que equivalen en la reacción de color de la ninhidrina a 1,0 μmoles de leucina en 5 horas a pH 7,4 y 37 °C en presencia de iones calcio. Una unidad de hidrólisis FALGPA hidroliza 1,0 μmoles de furilacriloil-Leu-Gly-Pro-Ala por minuto a 25°C. Una unidad de proteasa neutra hidroliza la caseína para producir color equivalente a 1,0 μmoles de tirosina por 5 horas a pH 7,5 y 37°C. Una unidad de clostripaína hidroliza 1,0 μmoles de BAEE por minuto a pH 7,6 y 25°C en presencia de DTT.

Las disoluciones se preparan normalmente a 1-2 mg/ml en tampón TESCA (que contiene TES 50 mM, cloruro de calcio 0,36 mM a pH 7,4 y 37°C.)
Este producto contiene también clostripaína, proteasa neutra inespecífica, y actividades trípticas.