Colagenasa from Clostridium histolyticum

La enzima colagenasa de Clostridium histolyticum tiene un dominio de unión al colágeno (CBD) y dominios semejantes a la nefropatía poliquística (PKD-like). También tiene un sitio de unión al Ca²⁺ para unir calcio, que es crucial para su funcionalidad. La colagenasa se utiliza en el tratamiento de la contractura de Dupuytren, una enfermedad del tejido conjuntivo.

Este producto es adecuado para la desagregación de tumores humanos, riñón de ratón, cerebro fetal y adulto humano, pulmón y muchos otros tejidos epiteliales. También se ha demostrado su eficacia en los estudios de perfusión del hígado y el riñón, digestión del páncreas, aislamiento de las células hepáticas no parenquimatosas de rata y en la preparación de hepatocitos. La colagenasa se ha utilizado también para la preparación de tejido arterial para el estudio de los productos finales de glucosilación avanzada. Esta enzima se ha estudiado para la liberación de hepatocitos a una concentración aproximada de 1 mg/ml. Concentraciones para el intervalo de digestión entre 0,1 y 5,0 mg/ml.

La colagenasa de Clostridium histolyticum se ha utilizado en la digestión:

• de muestras pancreáticas para aislamiento de los islotes
• de muestras de la arteria pulmonar para aislamiento de las células de musculatura lisa vascular pulmonar (PVSMC)
• de muestras de cartílago para aislamiento de condrocitos

La colagenasa es activada por cuatro átomo-gramos de calcio por mol de enzima. Es inhibida por el ácido etilenglicol-bis(beta-aminoetil éter) - N, N, N′,N′-tetraacético, el beta-mercaptoetanol, el glutatión, el ácido tioglicólico y la 8-hidroxiquinolina.

La colagenasa es una mezcla de enzimas secretadas por C. histolyticum y los diferentes productos se diferencian por las proporciones relativas de los 10-18 componentes que se encuentran en las enzimas secretadas. Los principales componentes son dos colagenasas, la clostripaína y una proteasa neutra. La acción sinérgica de esas enzimas degrada el colágeno y otro material intracelular. La acción de las dos colagenasas y la proteasa neutra es necesaria para la separación efectiva de las células del tejido. Los sustratos naturales para la colagenasa son varios tipos de colágeno.

Este producto se prepara a partir de la colagenasas tipo XI (C7657) de Clostridium histolyticum. También contiene actividades clostripaína, proteasa neutra inespecífica y tríptica. Las disoluciones se preparan normalmente a una concentración de 1-2 mg/ml en tampón TESCA (que contiene TES 50 mM, cloruro de calcio 0,36 mM a pH 7,4 y 37°C.)

Una unidad de digestión de colágeno (CDU) libera péptidos del colágeno del tendón de Aquiles bovino que equivalen en la reacción de color de la ninhidrina a 1,0 μmoles de leucina en 5 horas a pH 7,4 y 37 °C en presencia de iones calcio. Una unidad de hidrólisis FALGPA hidroliza 1,0 μmoles de furilacriloil-Leu-Gly-Pro-Ala por minuto a 25°C. Una unidad de proteasa neutra hidroliza la caseína para producir color equivalente a 1,0 μmoles de tirosina por 5 horas a pH 7,5 y 37°C. Una unidad de clostripaína hidroliza 1,0 μmoles de BAEE por minuto a pH 7,6 y 25°C en presencia de DTT.

Tal como se suministra, este producto es estable durante un año a -20°C. No hay pérdida de actividad FALGPA ni actividad proteasa en 30 días a 37°C, 50°C y -20°C. Las disoluciones de colagenasa cruda son estables si se congelan rápidamente en alícuotas (a 10 mg/ml) y se conservan congeladas a -20°C. Otros ciclos de congelación-descongelación dañarán la disolución. El producto retiene el 100 % de su actividad durante 7 horas si se conserva en hielo.