Desoxirribonucleasa I from bovine pancreas

La ADNasa I, o desoxirribonucleasa I, es una endonucleasa aislada del páncreas bovino.

• Nuestra ADNasa I digiere ADN bicatenario y monocatenario en oligonucleótidos y mononucleótidos.
• La ADNasa pancreática bovina existe como cuatro isoenzimas, con puntos isoeléctricos para A, B, C y D: 5,22, 4,96, 5,06 y 4,78.3. La forma predominante es la A, con cantidades menores de B y C, y sólo una cantidad mínima de D.
• La estructura de la ADNasa I se parece a la estructura de la exonucleasa III Incluye dos láminas β centrales. Cada lámina β está compuesta por seis cadenas-β. Este complejo de láminas β está rodeado por un extenso lazo y regiones α-helicoidales. Esta enzima comparte semejanza estructural con la exonucleasa III.^[1]

Utilizado para eliminación del ADN de las muestras proteicas.

La ADNasa I es una endonucleasa que actúa sobre los enlaces fosfodiéster adyacentes a pirimidinas para producir polinucleótidos con 5′-fosfatos terminales. En presencia de Mg²⁺, la ADNasa I escinde cada hebra de ADN independientemente y los sitios de rotura son aleatorios. Las dos hebras de ADN se rompen aproximadamente en el mismo sitio en presencia de Mn²⁺. Cationes divalentes como Mn²⁺, Ca²⁺, Co²⁺ y Zn²⁺ son activadores de la enzima. Una concentración de Ca²⁺ 5 mM estabiliza la enzima contra la digestión proteolítica. Se observó que el pH óptimo se encontraba entre 7 y 8. La ADNasa I de páncreas bovino consta de cuatro componentes distinguibles mediante cromatografía, el A, el B, el C y el D, en proporciones molares de 4:1:1. Sólo se encuentran cantidades menores del componente D. Se sabe que el 2-mercaptoetanol, los quelantes, el dodecilsulfatosódico (SDS) y la actina inhiben la actividad de la enzima.

Nuestra desoxirribonucleasa ADNasa I es esencialmente un producto exento de ARNasa, que admite la aplicación del producto.

Preparación en bruto, contiene cloruro de calcio

Una disolución de 10 mg/ml de ADNasa I en NaCl 0,15 M pierde un <10% de su actividad cuando se almacena durante una semana en alícuotas a −20 °C. Las mismas disoluciones conservadas en alícuotas a 2-8 °C pueden perder aproximadamente un 20 % de actividad. Permanece activa durante un máximo de cinco horas a 60 °C a un pH comprendido entre 5 y 7, y pierde actividad en <10 minutos a 68 °C. Pierde actividad a un ritmo de un 6%/hora en tampón acetato (pH 5,0) y tampón tris (pH 7,2) a una concentración de 1 mg/ml.

Proteína determinada mediante Biuret

Una unidad Kunitz producirá un cambio en A₂₆₀ de 0,001 por minuto por ml a pH 5,0 y 25 °C, utilizando como sustrato ADN de tipo I o III.