培地の調製

培地の調製

市販の培養培地は、脱水または粉末状、液体濃縮液、あるいは使用液の形で提供されています。ブロス培養用の脱水培地は、蒸留水に溶解し、滅菌前に最終pHを調整して調製する必要があります。寒天培養用の粉末培地は、蒸留水に溶解して撹拌した後、煮沸またはオートクレーブ処理を行い、無菌操作法を用いて滅菌済みのペトリ皿に注ぎ込む必要があります。 液体濃縮液として提供される培地は、蒸留水で無菌的に希釈し、pHを調整した後、保存用の滅菌容器に分注する必要があります。使用液として提供される培地は、必要な血清やその他の添加物を、無菌ろ過および／または無菌条件下で添加し、細胞増殖に適した温度まで加温すれば、すぐに使用可能です。

培養培地の滅菌

粉末から調製した培養培地は、使用前にろ過、加熱、またはオートクレーブ処理によって滅菌しなければならない。液体培地は多くの場合、無菌状態で即用濃度のまま供給されるが、特に使用前に血清やその他の添加物を加える場合は、無菌ろ過を行うことが推奨される。滅菌後は、交差汚染や不要な微生物の増殖を防ぐため、培養培地の取り扱いには無菌操作を遵守すべきである。

培養培地の添加剤

細胞の培養や調節に必要な特定の添加剤は、不安定であったり熱に弱かったりするため、使用前にユーザーが熱滅菌済みの基礎培地に添加する必要があります。通常、ウシ由来の血清（FBS）は、動物細胞培養培地で一般的に使用される添加剤です。特定の細胞種の増殖には、ホルモン、成長因子、および特定のシグナル伝達分子が必要となる場合があります。IPTGなどの添加剤は、タンパク質の発現を誘導するために使用されます。 また、細菌や真菌による汚染の増殖を抑制するために、培養培地に抗生物質が添加されることもあるが、培地の適切な取り扱いと保管によって汚染は十分に抑制できる。

培養培地の保存と使用

市販の培養培地や調製済みの培養培地（液体、注型寒天、または作業用溶液）は、通常、日陰の4 °Cで保存されます。これは、日和見微生物の増殖を抑制し、光による培養培地成分の分解を防ぐためです。培養物を接種する前に、培地を細胞増殖に適した温度まで温める必要があります。