원시 세포 배양 FAQ

• 세포가 담긴 냉동 바이알을 37°C 수조에서 해동하십시오. 보통 1~2분 정도 소요됩니다.
  
• 바이알에 아직 작은 얼음 결정이 남아 있을 때 수조에서 꺼냅니다.
  
• 열에 장시간 노출되면 세포가 손상되어 배양 접시에 잘 부착되지 않습니다.
  
• 해동 후 DMSO를 제거하기 위해 세포를 원심 분리하지 마십시오. 원심 분리 과정은 DMSO보다 더 큰 세포 손상을 유발할 수 있습니다. 권장량의 배지에 세포를 접종한 후에는 DMSO가 충분히 희석되어 세포에 즉각적인 해를 끼치지 않도록 해야 합니다.
  
• 실온에서 벤치탑에서 세포를 해동하지 마십시오.

냉동 보존된 세포를 해동 및 배양 접시에 접종한 후, 잔류 DMSO와 사멸 세포를 모두 제거하기 위해 첫 번째 배지 교체는 24시간 후 또는 하룻밤이 지난 후에 수행해야 합니다. 이후 세포를 분주할 준비가 될 때까지 48시간마다 배지를 교체해야 합니다. 보다 구체적인 지침은 각 세포주별 프로토콜에 포함되어 있습니다.

이를 위해 세포의 증식 잠재력을 설명할 때 "배양" 대신 "배양 배수"라는 용어를 사용합니다. 배양 배수란 배양된 세포의 총 수가 두 배로 증가하는 것을 의미합니다. 패시지는 한 배양 용기에서 3~4개의 용기로 세포를 분주하여 배양하는 것을 의미합니다. 연구자마다 분주 시 사용하는 분할 비율이 다르기 때문에 특정 1차 세포로 몇 번의 패시지를 얻을 수 있을지 예측하기 어렵습니다. 머크의 1차 세포는 해당 세포별 배양 배지를 사용하여 배양할 경우, 제품 설명에 명시된 특정 횟수의 배양 배수 증가를 보장합니다.

아니요, 머크의 완전 배지는 완전히 보충되어 사용자의 편의를 위해 바로 사용할 수 있습니다. 각 완전 배지에는 최적화된 세포 성장에 필요한 모든 필수 성분이 포함되어 있습니다.

네, 머크는 기초 배지와 성장 보충제를 개별 포장하여 제공합니다.

• 완전 보충된 배지는 4°C에서 6개월간 안정적이다.
• 기초 배지는 4°C에서 1년간 안정적입니다.
• 성장 보충제는 4°C에서 4일간 안정적이며, -20°C에서는 1년간 안정적입니다.

최적의 세포 성장을 위해 아래 취급 지침을 따르십시오.

• 배지에 포함된 빛에 민감한 비타민 성분으로 인해 빛에 노출시키지 마십시오.
• 성장 배지를 냉동하지 마십시오.
• 사용 전 배지를 37°C로 가열하지 마십시오.
• 사용 전, 성장 배지를 냉장고에서 꺼내어 실온에서 어두운 곳(캐비닛 내)에서 몇 시간 동안 서서히 해동하는 것이 바람직합니다.

머크가 제공하는 대부분의 세포는 표준 조직 배양 등급 용기에 접종할 수 있습니다. 다만 일부 세포 유형은 코팅 재료가 필요합니다. 구체적인 지침은 해당 세포 제품 웹페이지에서 하위 배양 프로토콜을 참조하시기 바랍니다.

• 모든 시약은 실온 상태여야 합니다. 어떤 시약도 37°C로 가열하지 마십시오.
• 과도한 트립신 처리를 하지 마십시오. 머크 프로토콜의 트립신 처리 지침을 엄격히 준수하십시오.
• 트립신화 과정 전체 동안 현미경으로 세포를 관찰하십시오.
• 세포가 둥글어졌으나 여전히 부착된 상태일 때, 세포가 분리될 때까지 플라스크 측면을 손바닥에 부딪혀 주세요. (둥글어진 세포가 부딪히지 않고 스스로 분리된다면 세포가 과도하게 트립신 처리된 것입니다.)
• 크라이오바이알을 실온에 노출시키지 마십시오. 크라이오바이알은 항상 드라이아이스 상태로 보관하여 이송하십시오.