SDS-PAGE 겔용 mPAGE^® Lux 겔 주조 시스템으로 겔을 더 빠르게 주조하는 방법

3분 만에 바로 사용 가능한 SDS-PAGE 겔을 위한 mPAGE^® Lux 캐스팅 시스템을 만나보세요. 필요할 때 바로 사용할 수 있는 신선한 SDS-PAGE 겔. 관심이 있으신가요? 아래에서 정보를 요청하세요.

젤 주조의 간편화

SDS-PAGE용 겔을 어떻게 주조하나요? 겔 주조는 일반적으로 분해 겔과 적층 겔을 시간 소모적인 단계별 공정으로 주입하는 과정을 포함합니다. 연구자들은 전통적으로 겔 주조 및 전기영동 요구를 충족할 수 있는 선택지가 거의 없었습니다. 혁신적인 mPAGE^® Lux SDS-PAGE 겔 주조 시스템은 수동 주조 겔의 유연성과 프리캐스트 겔의 신뢰성을 동시에 제공하도록 설계되었습니다. 품질 저하나 시간 소모, 대체 옵션에 수반되는 상당한 비용 증가 없이 말이죠. mPAGE^® Lux 주조 시스템으로 3분 이내에 겔을 완성하세요. 겔 제작을 위한 기존 방식과 그에 따른 시간 소모적인 수동 단계를 이제 작별할 수 있습니다. 참 신선하죠.

mPAGE^® Lux 겔 캐스팅 시스템의 특징 및 장점

mPAGE^® Lux 겔 주조 시스템은 단백질 겔 주조 공정을 더 빠르고, 더 간단하며, 더 안전한 방법으로 대체하여 재현성이 높은 결과를 제공합니다. 기존 방식이 90분 이상 소요되는 반면, mPAGE^® Lux 주조 시스템으로 미니 겔을 90초 만에 경화시킬 수 있습니다. UV 조사 방식의 신속한 캐스팅 워크플로우는 mPAGE^® Lux Bis-Tris 시약의 경화 속도를 가속화하며, Bis-Tris 겔 화학은 기존 방식 대비 더 짧은 전기영동 시간을 가능하게 합니다. 아래 동영상에서 이 캐스팅 시스템으로 단백질 겔을 제작하는 방법을 확인하세요.

정밀한 시스템 제어와 함께 준비 단계가 적은 원스텝 광중합은 오류 발생 가능성을 줄여줍니다. 머크의 mPAGE^® 캐스터는 누출을 방지하며, Bis-Tris 겔 사용은 수제 Tris-Glycine 겔에 비해 우수한 밴드 품질을 제공합니다. 또한 mPAGE^® Lux 시약 키트, mPAGE^® TurboMix 시약 키트 및 mPAGE^® 프리캐스트 겔은 모두 Bis-Tris 화학 기술을 사용하며 동일한 전기영동 완충액과 겔 염색제를 공유합니다. 머크의 mPAGE^® Lux 캐스팅 시스템은 APS 또는 TEMED를 사용하지 않아 유독성 화학 물질 사용을 줄인 안전한 옵션을 제공합니다.

호환성과 워크플로우 요구 사항을 더욱 개선하기 위해, 이제 mPAGE^® 클립온 마스크를 제공합니다. mPAGE^® 클립온 마스크를 사용하면 Bio-Rad Mini-PROTEAN^® 쇼트 플레이트, 스페이서 플레이트 및 콤은 물론 mPAGE^® 미니 쇼트 플레이트, 스페이서 플레이트 및 콤을 경화 시스템인 mPAGE^® Lux 경화 스테이션으로 겔을 경화할 때 사용할 수 있습니다.

참고: 클립온 마스크를 사용할 경우 mPAGE^® Lux 마스킹 숏 플레이트는 더 이상 필요하지 않으나, 마스킹 숏 플레이트도 여전히 함께 사용할 수 있습니다.

전통 수제 주조 작업 흐름

젤 캐스팅의 단계는 무엇인가요?

SDS-PAGE 겔 주조는 일반적으로 겔 용액 계량, 사전 혼합, 주조, 중합을 위한 대기 시간으로 구성됩니다. 경제적인 해결책으로 자주 언급되지만, 기존의 수동 겔 주조 방법은 시간이 많이 소요되며 여러 수동 단계를 필요로 하여 겔 조제법이 일관되지 않을 수 있습니다. 수동 주조 겔의 품질과 이를 통해 생성될 수 있는 데이터는 단백질 겔 조제법의 일관성에 달려 있으므로, 겔 실패로 인해 소중한 시약과 시간이 낭비되지 않도록 해야 합니다.

mPAGE^® Lux 캐스팅 시스템은 겔 캐스팅 공정에 혁신적인 솔루션을 제공합니다. 이제 시간과 자원을 절약하는 것 중 하나만 선택할 필요가 없습니다. 머크의 새로운 겔 캐스팅 시스템을 통해 연구자들은 필요할 때 신속하게 겔을 쉽게 캐스팅할 수 있으며, 이는 프리캐스트 겔 기술에 비해 훨씬 저렴한 비용으로 가능합니다. mPAGE^® Lux 캐스팅 시스템으로 실험실 효율성을 높이고 겔 전기영동 워크플로우를 업그레이드하십시오.

mPAGE^® Lux 캐스팅 시스템 및 Bis-Tris 시약 키트

mPAGE^® Lux 캐스팅 시스템을 실험실에 도입하면 3분 이내에 즉시 사용 가능한 웨스턴 블롯 겔과 전기영동 겔을 확보할 수 있습니다. 숨을 고르며 폐기물을 줄이고 실패에 대한 걱정 없이 빠른 겔 캐스팅 과정에 익숙해지세요. 신선한 경험입니다. mPAGE^® Lux 경화 스테이션, mPAGE^® Lux 혼합 튜브, mPAGE^® 젤 캐스터, 10웰 및 15웰 mPAGE^® 콤, mPAGE^® 미니 스페이서 플레이트, 10웰 및 15웰 mPAGE^® Lux 마스킹 숏 플레이트로 구성된 mPAGE^® Lux 캐스팅 시스템 키트를 활용하세요. 캐스팅 키트 설명 및 구성은 다음과 같습니다:

 mPAGE^® Lux SDS-PAGE 겔 주조 프로토콜

모든 용액은 중합을 방지하기 위해 직사광선을 피해야 합니다. 겔 주조 전 모든 용액을 실온으로 유지하십시오.

분리 겔

1. 분리 겔 용액을 분리 용액과 희석제로 혼합하여 준비하십시오. 혼합 체적은 아래 표를 참조하십시오. 여러 개의 겔을 연속적으로 제작하기 위해 분리 겔 용액을 대량으로 준비할 수 있습니다.
2. 깨끗한 피펫을 사용하여 검정색 혼합 튜브 또는 다른 불투명 용기에 분해 용액을 넣으십시오.
3. 깨끗한 피펫을 사용하여 동일한 혼합 튜브에 희석제를 첨가하십시오.
4. 용기를 끝에서 끝까지 부드럽게 뒤집어 혼합하십시오. 보텍스하지 마십시오.

분리 겔 용액 용량

단일 1.0 mm 겔을 제조할 때 아래 용량을 사용하십시오. 0.75 mm 및 1.5 mm 용액 용량은 제품 페이지에서 제공되는 전체 사용자 가이드를 참조하십시오.

스태킹 젤

스태킹 용액은 병에서 바로 사용할 수 있습니다. 1.0mm 겔에는 1.5mL의 스태킹 용액을 사용하십시오. 중요: 스태킹 용액을 희석하지 마십시오.

젤 주조

1. 유리판을 중성 세제로 세척한 후 탈이온수로 헹굽니다. 사용 전 70% 에탄올로 닦아냅니다.
2. mPAGE^® 스페이서 플레이트와 mPAGE^® 럭스 마스킹 쇼트 플레이트를 사용하여 mPAGE^® 겔 캐스터를 조립하여 유리 카세트를 형성하십시오. 마스킹 쇼트 플레이트는 카세트 왼쪽에 텍스트가 위치하도록 방향을 맞추어야 합니다. 캐스터 클램프를 닫기 전에 두 유리판이 캐스터 프레임 하단에서 정렬되었는지 확인하십시오. 참고: mPAGE^® 럭스 마스킹 쇼트 플레이트는 mPAGE^® 경화 스테이션과 함께 사용해야 합니다.
3. 전원 버튼을 눌러 mPAGE^® Lux 경화 스테이션의 전원을 켭니다. 경화 스테이션이 자체 테스트를 시작합니다. 자체 테스트가 완료되면 준비 완료 화면이 나타납니다.
4. 도어를 열고 겔 캐스터를 경화 스테이션에 넣으십시오. 캐스터를 범퍼 뒤에 정렬하십시오.
5. 깨끗한 5mL 피펫을 사용하여 준비된 분해 젤 용액을 mPAGE^® 젤 캐스터 프레임의 표시된 채움 선까지 추가하십시오.
6. 깨끗한 5mL 피펫을 사용하여 스태킹 용액을 짧은 플레이트 상단까지 천천히 주입합니다.
7. 기포 발생을 방지하기 위해 mPAGE^® 빗을 이빨 아래로 비스듬히 천천히 삽입하십시오. 중요: 서로 다른 웰 형식을 혼용하면 웰 형성이 불량해질 수 있습니다. 사용:
   • 10-웰 콤과 10-웰 mPAGE^® Lux Masked Short Plates
   • 15-웰 콤과 15-웰 mPAGE^® Lux 마스킹된 짧은 플레이트
8. 숏 플레이트 앞쪽에 넘친 용액을 닦아내어 넘친 부분이 있는 곳에서 불완전 경화가 발생하지 않도록 하십시오.
9. 클립온 마스크를 쇼트 플레이트와 캐스팅 프레임 위에 설치하십시오.
   • 마스크 앞면은 숏 플레이트에 꼭 밀착되어 빗살을 완전히 덮어야 합니다.
10. 경화 스테이션 도어를 닫고 젤 두께를 선택하십시오.
11. 시작 버튼을 눌러 겔 경화를 시작하십시오. 팁: 여러 개의 겔을 주조하는 경우, 첫 번째 겔이 경화되는 동안 두 번째 겔 캐스터로 겔 주조 과정을 시작하십시오.
12. 경화가 완료되면 도어를 열고 젤 캐스터를 제거하십시오. 텐션 클립을 내려 캐스터 프레임을 해제하여 젤 캐스터에서 카세트를 제거하십시오. 그런 다음 프레임의 측면을 열고 카세트를 위쪽에서 밀어 빼내십시오.
13. 젤을 즉시 사용하거나, 카세트를 젖은 종이 타월로 감싼 후 지퍼백이나 기타 밀폐 용기에 넣어 2-8°C에서 최대 2주간 보관하십시오. 카세트를 포장하지 않은 상태로 두면 젤이 마르므로 주의하십시오.

mPAGE^® Lux Bis-Tris 겔 (MOPS 및 MES 주행 완충액 포함)

mPAGE^® Lux Bis-Tris 겔은 MOPS 또는 MES 주행 완충액과만 독점적으로 작동하도록 설계되었습니다. 사용되는 주행 완충액에 따라 매우 뚜렷한 분리 패턴을 얻을 수 있습니다. MOPS 완충액은 대형 및 중형 단백질의 분리를 미세 조정하는 데 사용할 수 있는 반면, MES 완충액은 소형 단백질의 최적 분리를 제공합니다. 의도된 분리 범위에 가장 적합한 겔 주행 완충액 시스템을 결정하려면 이동도 차트(그림 8)를 참조하십시오.

전기영동 후 겔 제거 방법

젤 스크레이퍼를 사용하여 유리 카세트에서 젤을 제거하십시오. 젤이 찢어지지 않도록 젤 가장자리(오른쪽)를 따라 잘라내십시오. mPAGE^® Lux Bis-Tris 젤은 반드시 MOPS-SDS 또는 MES-SDS 전기영동 완충액과 함께 사용해야 합니다. Bis-Tris 젤은 Tris-Glycine 전기영동 완충액과 호환되지 않습니다.

mPAGE^® Lux 겔 주조 시스템으로 지속 가능한 겔 주조

mPAGE^® Lux 캐스팅 시스템의 지속가능성 영향을 정량화하기 위해, 단백질 전기영동을 위한 폴리아크릴아마이드 젤 수동 주조에 사용되는 대표적인 빠른 주조 키트 대비 계산을 수행했습니다. 두 시스템 모두 재사용 가능한 주조 키트와 수동 주조 시약 키트의 사용이 필요합니다. mPAGE^® Lux 캐스팅 시스템은 추가로 mPAGE^® Lux 겔 경화 스테이션 사용이 필요한 반면, 기준 시스템은 수동 주조 시약 키트와 별도로 판매되는 APS 및 TEMED 사용이 필요합니다.

mPAGE^® Lux 경화 스테이션의 최소 서비스 수명인 5년 동안 전기영동 겔 주조에 필요한 모든 구성 요소가 본 평가에 포함되었습니다. 여기에는 수동 주조 키트, 필수 시약 및 필요한 모든 소모성 실험 용기의 생산, 포장, 유통, 사용 및 수명 종료 시 영향이 포함됩니다. 연간 250개, 500개 또는 1000개의 겔 생산을 가정하여 계산되었으며, 기준 시스템 대비 최소 차이를 주장하였습니다.

재료 및 제품 지속가능성 특성

mPAGE^® Lux 캐스팅 시스템은 핸드캐스팅 폴리아크릴아미드 겔을 위한 혁신적인 워크플로우 솔루션이지만, 일부 플라스틱 소모품과 유해 시약의 사용이 여전히 필요합니다. 이 응용 분야에서 아크릴아마이드를 대체할 적합한 물질은 존재하지 않지만, 이 시스템에서는 나머지 모든 화학적 위험 요소가 제거되었으며, 기준 시스템 대비 필요한 플라스틱 소모품의 양이 크게 감소되었습니다.

그래프에서 볼 수 있듯이, mPAGE^® Lux Casting System에 필요한 겔 경화 스테이션의 추가 질량은 겔 주조 워크플로우에서 필요한 제품 감소로 상쇄됩니다. 장비 수명 기간 동안 총 시스템 질량은 고속 주조 시스템 대비 최소 20% 감소합니다.

연간 500개 겔 주조 시 시스템 총 질량(kg):

또한 본 제품은 SMASH 패키징 원칙을 준수합니다. 이는 포장재 감축, 지속가능한 소재 확대, 재활용 용이성 제고를 통해 포장재의 지속가능성을 개선하는 머크의 전략입니다.

• 기능적 단위를 구성하는 제품 및 추가 품목의 포장은 기준 시스템 대비 30% 감소되었습니다.
• 시스템 내 섬유 기반 포장재의 100%가 지속 가능한 산림 인증을 획득했습니다.
• 모든 보호용 폼 인서트는 100% 재생 폴리에틸렌으로 제작되었습니다.
• 포장재에는 머크의 SMASH 가이드라인에 정의된 바와 같이 재활용을 방해하는 어떠한 재료도 포함되어 있지 않습니다.

mPAGE^® Lux 주조 시스템 유통 및 제품 사용

필요한 소모품의 감소 및 특정 시약의 제거로 인해 운송과 관련된 영향이 크게 감소합니다. 정기적으로 배송되는 부품 및 관련 포장의 질량 감소는 장비의 최소 서비스 수명 동안 최소 24% 이상입니다.

추가된 장비는 작동 시 에너지가 필요하지만, mPAGE^® Lux 캐스팅 스테이션은 에너지 효율성을 고려하여 설계되었습니다. LED 조명과 단순하면서도 직관적인 사용자 인터페이스를 활용함으로써 전체 에너지 소비량은 매우 낮은 수준을 유지합니다. 1000개의 겔을 경화하는 데 필요한 누적 에너지 소비량은 단 1.65kWh로, 이는 노트북 약 33시간 사용에 해당합니다. 겔 주조 작업 전반에서 발생하는 일회용 플라스틱 폐기물 양은 최소 25% 이상 감소합니다. 또한 mPAGE^® Lux 시약은 주변 조명에 노출되면 자체 중합되므로 폐기물 흐름에서 미중합 아크릴아마이드 잔류물이 발생하지 않습니다.

필요 시 신선하고 즉시 사용 가능한 겔을 주조함으로써, 사용되지 않을 겔을 미리 준비하는 위험을 제거합니다. mPAGE^® Lux 시스템은 다양한 농도의 시약 키트나 미리 주조된 겔을 비축할 필요가 없어, 성분 유효기간 만료로 인한 폐기물 발생량을 줄입니다. mPAGE^® Lux 경화 스테이션은 전자 장비이므로, 모든 관련 규정을 준수하여 폐기해야 합니다. 전자 폐기물 처리에 대한 자세한 내용은 WEEE 규정 준수 페이지를 참조하십시오.

본 제품은 전체 제품 수명 주기 동안 기준 시스템 대비 상당한 개선 효과를 입증하여 친환경 대체 제품으로 지정되었습니다. 자세한 내용은 머크의 지속가능성 설계 프레임워크 및 친환경 대체 제품 페이지를 참조하십시오.

mPAGE^® Lux 시스템을 이용한 염색 없이 겔 내 단백질 검출의 신속한 시각화

SDS-PAGE는 단백질 및 기타 생체 분자를 크기별로 분리하는 데 널리 사용되는 기술입니다. 겔 내 단백질은 쿠마시 브릴리언트 블루(CBB), 실버 스테인, SYPRO™ 루비와 같은 확립된 비색 또는 형광 염색법을 사용하여 검출할 수 있습니다. 이러한 염색 방법은 감도가 다양하며 종종 여러 번의 시간이 많이 소요되는 배양 단계를 필요로 합니다.

초기 형광 소거제로 기술된 트리클로로에탄올(TCE)은 자외선 활성화 시 새로운 형광체를 생성하여 트립토판 형광을 본래 방출 파장(~350 nm)에서 가시광선 영역(~512 nm)으로 이동시키는 화합물입니다.^1-3 TCE 및 기타 트리클로로 화합물의 이러한 특성은 Kazmin 등이 신속하고 민감한 1단계 겔 염색 솔루션을 개발하는 데 활용되었습니다.⁴ 이후 TCE는 겔 준비 과정에서 SDS-PAGE 겔에 직접 첨가되어 번거로운 염색 단계 없이 단백질 검출이 가능해졌습니다.^5,6 본 연구에서는 염색 없이 겔 내 단백질 검출을 가능하게 하는 TCE를 포함한 mPAGE^® Lux 겔 준비 방법을 설명합니다.

염색법 대 무염색법 비교

TCE 시각화법과 쿠마시 젤 염색법의 비교를 수행하였다. 두 방법 간 검출 감도는 유사하였다(그림 10). 그러나 TCE 기반 검출법은 염색 단계가 필요하지 않아, 현재 사용 중인 염색법에 따라 최소 2시간에서 수 시간의 준비 시간을 절약할 수 있다.

방법 호환성

이 방법과 다운스트림 분석(본 사례에서는 웨스턴 블롯팅) 간의 호환성 또한 평가되었습니다. 그림 11은 TCE 처리 유무에 따른 웨스턴 블롯 비교 결과를 보여줍니다. 여기에서 볼 수 있듯이, 웨스턴 블롯 겔을 45초 동안 활성화하고 전이 전에 이미징했을 때 유사한 면역검출 감도가 관찰되었습니다.

그러나 mPAGE^® Lux 겔 중합의 특성상, 활성화 및 노출 시간을 연장하면 단백질 전이 효율이 저하될 수 있습니다. 단백질 전이 조건을 최적화해야 할 수 있습니다. TCE 시각화 후 웨스턴 블로팅을 수행할 경우, 활성화 과정이 mPAGE^® Lux 겔의 전이 효율에 영향을 미칠 수 있으므로 가능한 한 최단 활성화 시간을 사용하는 것이 권장됩니다.

TCE 활성화 방식의 무염색 기술

이 TCE 활성화 방법은 추가 염색 단계가 필요하지 않아 시간을 절약할 수 있으며 전기영동 직후 즉시 수행할 수 있습니다. 본 결과는 단백질 검출 감도가 염색을 사용하는 다른 기존 방법과 유사함을 보여줍니다.

전반적으로 mPAGE^® Lux 겔 및 기타 mPAGE^® 전기영동 제품을 사용하면 겔을 빠르고 재현성 있게 제작 및 실행할 수 있습니다. 또한 mPAGE^® Lux 겔은 본 문서에서 설명한 TCE를 이용한 무염색 기술과 호환되므로, 기존 프로토콜의 단계를 더욱 줄일 수 있습니다. 이는 연구자들에게 mPAGE^® Lux 캐스팅 기술의 편리성과 유연성을 계속 활용하면서도 신속한 단백질 시각화의 추가 이점을 얻을 수 있는 가치 있는 도구를 제공합니다.

mPAGE^® Lux 캐스팅 시스템 및 관련 시약 주문