Comment réaliser des gels plus rapidement grâce au système de coulée mPAGE® Lux pour les gels SDS-PAGE

Découvrez le système de coulée mPAGE® Lux pour obtenir des gels SDS-PAGE prêts à l'emploi en 3 minutes. Des gels SDS-PAGE frais, prêts à l'emploi dès que vous en avez besoin. Cela vous intéresse ? Demandez des informations ci-dessous.

La coulée de gel en toute simplicité

Comment réaliser un gel pour la SDS-PAGE ? La préparation de gels implique généralement de couler les gels de résolution et d’empilement selon un processus par étapes qui prend beaucoup de temps. Les chercheurs disposent traditionnellement de peu d’options pour répondre à leurs besoins en matière de préparation de gels et d’électrophorèse. Notre système innovant de coulée de gels SDS-PAGE mPAGE® Lux est conçu pour offrir la flexibilité des gels coulés à la main et la fiabilité des gels précoulés, sans perte de qualité, sans perte de temps et sans les coûts nettement plus élevés associés aux autres options. Réalisez vos gels en moins de trois minutes grâce à notre système de coulée mPAGE® Lux. Vous pouvez dire adieu aux méthodes conventionnelles et à leurs étapes manuelles chronophages pour la création de gels. C'est une véritable innovation.

Caractéristiques et avantages du système de moulage de gels mPAGE® Lux

Le système de coulée de gel mPAGE® Lux remplace votre processus de coulée de gel protéique par des méthodes plus rapides, plus simples et plus sûres, offrant des résultats plus reproductibles. Réalisez la polymérisation d’un mini-gel en 90 secondes avec le système de coulée mPAGE® Lux, contre plus de 90 minutes avec les méthodes conventionnelles. Notre protocole de coulée rapide par irradiation UV accélère le durcissement des réactifs mPAGE® Lux Bis-Tris, tandis que la composition chimique du gel Bis-Tris permet des temps de coulée plus courts que les méthodes classiques. Découvrez comment réaliser des gels de protéines avec ce système de coulée dans la vidéo ci-dessous.

La photopolymérisation en une seule étape, associée à des contrôles précis du système et à un nombre réduit d’étapes de préparation, minimise les risques d’erreur. Notre mPAGE® Caster empêche les fuites et l’utilisation de gels Bis-Tris offre une qualité de bandes supérieure à celle des gels Tris-Glycine coulés à la main. De plus, le kit de réactifs mPAGE® Lux, le kit de réactifs mPAGE® TurboMix et les gels mPAGE® préfabriqués utilisent tous la chimie Bis-Tris et partagent les mêmes tampons de migration et colorants pour gel. Notre système de coulée mPAGE® Lux n’utilise ni APS ni TEMED et offre une option plus sûre grâce à une utilisation réduite de produits chimiques toxiques.

Afin d'améliorer encore la compatibilité et de répondre à vos besoins en matière de flux de travail, nous proposons désormais notre masque clipsable mPAGE® Clip-on Mask. Grâce à ce masque, les plaques courtes, les plaques d'espacement et les peignes Bio-Rad Mini-PROTEAN®, ainsi que les plaques courtes, les plaques d'espacement et les peignes mPAGE® Mini, peuvent être utilisés lors de la polymérisation d'un gel à l'aide du système de polymérisation mPAGE® Lux Curing Station.

Remarque : la plaque courte masquée mPAGE® Lux n’est plus nécessaire lorsque le masque clip-on est utilisé, bien que la plaque courte masquée puisse toujours être utilisée.

Processus traditionnel de moulage à la main

Quelles sont les étapes de la coulée de gel ?

La réalisation d’un gel SDS-PAGE implique souvent la pesée, le prémélange des solutions de gel, le coulage et un temps d’attente pour la polymérisation. Bien qu’elles soient souvent présentées comme une solution plus économique, les méthodes conventionnelles de coulage manuel de gels sont chronophages et nécessitent de nombreuses étapes manuelles, ce qui peut entraîner des formulations de gel incohérentes. La qualité des gels coulés à la main et les données qu’ils permettent de générer dépendent de la cohérence des formulations des recettes de gels protéiques, afin d’éviter que des réactifs précieux et du temps ne soient gaspillés en raison d’échecs de coulage.

Le système de coulée mPAGE® Lux offre une solution innovante pour votre processus de coulée de gels. Vous n'avez plus à choisir entre gagner du temps ou économiser des ressources. Notre nouveau système de coulée de gels permet aux chercheurs de réaliser facilement et rapidement leurs gels dès qu'ils en ont besoin, pour un coût bien inférieur à celui des technologies de gels préfabriqués. Améliorez l'efficacité de votre laboratoire et optimisez votre flux de travail en électrophorèse sur gel grâce au système de coulée mPAGE® Lux.

Système de coulée mPAGE® Lux et kits de réactifs Bis-Tris

Équipez votre laboratoire du système de coulée mPAGE® Lux et obtenez des gels de Western blot et d’électrophorèse prêts à l’emploi en moins de 3 minutes. Respirez un bon coup et habituez-vous à un processus de coulée rapide, générant moins de déchets et sans crainte d’échec. C’est une véritable nouveauté. Profitez de nos kits du système de coulée mPAGE® Lux comprenant la station de durcissement mPAGE® Lux, le tube de mélange mPAGE® Lux, le moule à gel mPAGE®, le peigne mPAGE® à 10 et 15 alvéoles, la mini-plaque d’espacement mPAGE® et les plaques courtes masquées mPAGE® Lux à 10 et 15 alvéoles. Voici les descriptions et configurations des kits de coulée :

 Protocole de coulage du gel SDS-PAGE mPAGE® Lux

Toutes les solutions doivent être protégées de la lumière du soleil afin d'éviter toute polymérisation. Avant de couler les gels, amenez toutes les solutions à température ambiante.

Gel de séparation

1. Préparez la solution de gel de séparation en mélangeant la solution de séparation et le diluant. Reportez-vous au tableau ci-dessous pour connaître les volumes de mélange. La solution de gel de séparation peut être préparée en grande quantité afin de réaliser plusieurs gels à la suite.
2. À l'aide d'une pipette propre, versez la solution de résolution dans un tube de mélange noir ou un autre récipient opaque.
3. À l'aide d'une pipette propre, ajoutez le diluant dans le même tube de mélange.
4. Mélangez en retournant délicatement le récipient d'un bout à l'autre. Ne pas agiter au vortex.

Volumes de la solution de gel de séparation

Utilisez les volumes indiqués ci-dessous pour préparer un seul gel de 1,0 mm. Pour les volumes de solution de 0,75 mm et 1,5 mm, consultez le guide d'utilisation complet disponible sur la page du produit.

Gel de superposition

La solution de chargement est prête à l'emploi dès sa sortie du flacon. Utilisez 1,5 ml de solution de chargement pour un gel de 1,0 mm. Important : ne pas diluer la solution de chargement.

Moulage du gel

1. Nettoyez les plaques de verre avec un détergent doux et rincez-les à l'eau déminéralisée. Essuyez-les avec de l'éthanol à 70 % avant utilisation.
2. Assemblez le moule à gel mPAGE® à l'aide de la plaque d'espacement mPAGE® et de la plaque courte masquée mPAGE® Lux afin de former une cassette en verre. La plaque courte masquée doit être orientée de manière à ce que le texte se trouve sur le côté gauche de la cassette. Assurez-vous que les deux plaques de verre sont bien alignées au fond du cadre du moule avant de fermer les pinces de serrage. Remarque : la plaque courte masquée mPAGE® Lux doit être utilisée avec la station de polymérisation mPAGE®.
3. Mettez la station de polymérisation mPAGE® Lux sous tension en appuyant sur le bouton d'alimentation. La station de polymérisation lancera un autotest. Une fois l'autotest terminé, l'écran « Prêt » s'affichera.
4. Ouvrez la porte et placez le moule à gel dans la station de polymérisation, en l'alignant derrière les butées.
5. À l’aide d’une pipette propre de 5 ml, versez la solution de gel de séparation préparée jusqu’au niveau indiqué sur le cadre du moule à gel mPAGE®.
6. À l’aide d’une pipette propre de 5 ml, ajoutez lentement la solution de superposition jusqu’au bord supérieur de la plaque courte.
7. Insérez lentement le peigne mPAGE® en biais pour éviter la formation de bulles d’air sous les dents. Important : le mélange de différents formats de puits peut entraîner une formation incorrecte des puits. Utilisez :
   • des peignes à 10 puits avec des plaques courtes masquées mPAGE® Lux à 10 puits
   • des peignes à 15 puits avec des plaques mPAGE® Lux Masked Short à 15 puits
8. Essuyez tout débordement de solution à l’avant de la plaque courte afin d’éviter un durcissement incomplet aux endroits où il y a eu débordement.
9. Placez le masque à clipser sur la plaque courte et le cadre de coulée.
   • L’avant du masque doit être bien ajusté contre la plaque courte, en recouvrant entièrement les dents du peigne.
10. Fermez la porte de la station de polymérisation et sélectionnez l'épaisseur du gel.
11. Appuyez sur « Start » pour lancer la polymérisation du gel. Astuce : si vous coulez plusieurs gels, lancez dès maintenant le processus de coulée du gel avec le deuxième Gel Caster, pendant que le premier gel est en cours de polymérisation.
12. Une fois le durcissement terminé, ouvrez la porte et retirez le « Gel Caster ». Retirez la cassette du « Gel Caster » en abaissant le clip de tension pour libérer le cadre du moule. Ouvrez ensuite les côtés du cadre et faites glisser la cassette vers l’extérieur par le haut.
13. Utilisez le gel immédiatement ou enveloppez la cassette dans du papier essuie-tout humide et conservez-la à plat dans un sac à fermeture zip ou un autre récipient hermétique à une température comprise entre 2 et 8 °C pendant 2 semaines maximum. Ne laissez pas les cassettes à l’air libre, car le gel risquerait de sécher.

Gels mPAGE® Lux Bis-Tris avec tampons de migration MOPS et MES

Les gels mPAGE® Lux Bis-Tris sont conçus pour fonctionner exclusivement avec un tampon de migration MOPS ou MES. Selon le tampon de migration utilisé, il est possible d’obtenir des profils de séparation très distincts. Le tampon MOPS permet d’affiner la séparation des protéines de grande et moyenne taille, tandis que le tampon MES assure une séparation optimale des protéines de plus petite taille. Reportez-vous aux tableaux de migration (figure 8) pour déterminer quel système de tampon de migration est le mieux adapté à la plage de séparation souhaitée.

Comment retirer le gel après une électrophorèse

Retirez le gel de la cassette en verre à l'aide d'un grattoir à gel. Découpez le long des bords du gel (à droite) pour éviter qu'il ne se déchire. Les gels mPAGE® Lux Bis-Tris doivent EXCLUSIVEMENT être utilisés avec un tampon de migration MOPS-SDS ou MES-SDS. Les gels Bis-Tris ne sont PAS compatibles avec le tampon de migration Tris-Glycine.

Moulage de gel durable avec le système de moulage mPAGE® Lux

Afin de quantifier l’impact durable de notre système de coulée mPAGE® Lux, des calculs ont été effectués en comparant son utilisation à celle d’un kit de coulée rapide représentatif destiné à la coulée manuelle de gels de polyacrylamide pour l’électrophorèse des protéines. Les deux systèmes nécessitent l’utilisation de kits de coulée réutilisables et de kits de réactifs pour la coulée manuelle. Le système de coulée mPAGE® Lux nécessite en outre l’utilisation de la station de polymérisation mPAGE® Lux, tandis que le système de référence nécessite l’utilisation d’APS et de TEMED, vendus séparément du kit de réactifs pour coulée manuelle.

Tous les composants nécessaires à la préparation de gels d’électrophorèse sur la durée de vie minimale de la station de polymérisation mPAGE® Lux, soit 5 ans, sont pris en compte dans cette évaluation. Cela inclut les impacts liés à la production, au conditionnement, à la distribution, à l’utilisation et à la fin de vie du kit de coulée manuelle, des réactifs nécessaires et de tout le matériel de laboratoire consommable requis. Les calculs ont été effectués en partant de l’hypothèse d’une production de 250, 500 ou 1 000 gels par an, et la différence minimale par rapport au système de référence a été prise en compte.

Caractéristiques de durabilité des matériaux et des produits

Bien qu’il s’agisse d’une solution innovante pour le moulage manuel de gels de polyacrylamide, le système de moulage mPAGE® Lux nécessite tout de même l’utilisation de certains consommables en plastique et de réactifs dangereux. Bien qu’il n’existe aucun substitut adapté à l’acrylamide dans cette application, tous les risques chimiques restants ont été éliminés de ce système et la quantité de consommables en plastique requise est considérablement réduite par rapport au système de référence.

La masse supplémentaire de la station de polymérisation des gels requise par le système de coulée mPAGE® Lux est compensée par la réduction des produits nécessaires au processus de coulée des gels, comme le montre le graphique. Sur toute la durée de vie de l’instrument, la masse totale du système est réduite d’au moins 20 % par rapport aux systèmes de coulée rapide.

Masse totale du système sur toute sa durée de vie (kg) pour le moulage de 500 gels/an :

De plus, ce produit respecte les principes de SMASH Packaging, notre stratégie visant à améliorer la durabilité des emballages grâce à une réduction du volume d'emballage, à l'utilisation de matériaux plus durables et à un recyclage facilité.

• L'emballage des produits et des éléments supplémentaires nécessaires au bon fonctionnement de l'ensemble est réduit de 30 % par rapport au système de référence.
• 100 % des emballages à base de fibres du système sont certifiés issus d’une gestion forestière durable.
• Tous les inserts de protection en mousse sont fabriqués à partir de polyéthylène 100 % recyclé.
• L'emballage ne contient aucun matériau susceptible d'entraver le recyclage, conformément à nos directives SMASH.

Distribution et utilisation du système de coulée mPAGE® Lux

La réduction des consommables nécessaires et la suppression de certains réactifs entraînent une diminution significative des impacts liés au transport. La réduction de la masse des composants régulièrement expédiés et de leurs emballages est d’au moins 24 % sur la durée de vie minimale de l’instrument.

Bien que l’instrument ajouté consomme de l’énergie pendant son fonctionnement, la station de moulage mPAGE® Lux a été conçue dans un souci d’efficacité énergétique. Grâce à l’utilisation d’un éclairage LED et d’une interface utilisateur simple et intuitive, la consommation d’énergie globale reste remarquablement faible. La consommation d’énergie cumulée nécessaire pour polymériser 1 000 gels n’est que de 1,65 kWh, ce qui équivaut à environ 33 heures d’utilisation d’un ordinateur portable. La quantité de déchets plastiques à usage unique générés tout au long du processus de coulée des gels est réduite d’au moins 25 %. De plus, les réactifs mPAGE® Lux se polymérisent spontanément lorsqu’ils sont exposés à la lumière ambiante, ce qui élimine les résidus d’acrylamide non polymérisés dans les flux de déchets.

En coulant des gels frais et prêts à l’emploi selon les besoins, on élimine le risque de préparer à l’avance des gels qui ne seront pas utilisés. Le système mPAGE® Lux supprime la nécessité de stocker des kits de réactifs ou des gels précoulés à différents pourcentages, ce qui réduit la quantité de déchets générés en raison de la péremption des composants. La station de polymérisation mPAGE® Lux est un équipement électronique et, à ce titre, doit être éliminée conformément à toutes les réglementations applicables. Pour plus d'informations sur l'élimination des déchets électroniques, consultez notre page consacrée à la conformité DEEE.

Ce produit a démontré des améliorations significatives par rapport au système de référence tout au long de son cycle de vie et a été désigné comme « produit alternatif plus écologique ». Pour plus d’informations, consultez notre page consacrée à notre cadre « Design for Sustainability » (Conception pour la durabilité) et à nos produits alternatifs plus écologiques.

Visualisation rapide de la détection des protéines dans le gel sans coloration à l’aide du système mPAGE® Lux

La SDS-PAGE est une technique couramment utilisée pour séparer les protéines et autres biomolécules en fonction de leur taille. Les protéines présentes dans le gel peuvent être détectées à l’aide de colorants colorimétriques ou fluorescents bien établis, tels que le bleu brillant de Coomassie (CBB), le colorant à l’argent et le SYPRO™ Ruby. Ces méthodes de coloration présentent des sensibilités variables et nécessitent souvent plusieurs étapes d’incubation chronophages.

D'abord décrit comme un extincteur de fluorescence, le trichloroéthanol (TCE) est un composé qui décale la fluorescence du tryptophane de sa longueur d'onde d'émission native (~350 nm) vers la lumière visible (~512 nm) en produisant un nouveau fluorophore lors de son activation par la lumière UV.^1-3 Cette propriété du TCE et d'autres composés trichlorés a été exploitée par Kazmin et al. pour mettre au point une solution de coloration de gel en une seule étape, à la fois rapide et sensible.⁴ Par la suite, le TCE a été incorporé directement dans les gels SDS-PAGE lors de leur préparation, ce qui a permis la détection des protéines sans étapes de coloration fastidieuses.^5,6 Nous décrivons ici la préparation de gels mPAGE® Lux avec du TCE afin de permettre la détection des protéines dans le gel sans coloration.

Comparaison entre la méthode avec coloration et la méthode sans coloration

Une comparaison a été effectuée entre la visualisation au TCE et les méthodes de coloration des gels au Coomassie. La sensibilité de détection était similaire entre les deux méthodes (figure 10). Cependant, la détection à base de TCE ne nécessite pas d’étape de coloration, ce qui permet de gagner au moins deux à plusieurs heures de temps de préparation, selon la méthode de coloration que vous utilisez actuellement.

Compatibilité de la méthode

La compatibilité de cette méthode avec l’analyse en aval, en l’occurrence le Western blot, a également été évaluée. La figure 11 présente une comparaison entre un Western blot réalisé avec et sans TCE. Une sensibilité d’immunodétection similaire a été observée lorsque les gels de Western blot ont été activés pendant 45 secondes et imagés avant le transfert, comme illustré ici.

Toutefois, en raison de la nature de la polymérisation du gel mPAGE® Lux, des temps d’activation et d’exposition plus longs peuvent altérer l’efficacité du transfert des protéines. Il peut s’avérer nécessaire d’optimiser le transfert des protéines. Si un Western blot doit être réalisé après une visualisation au TCE, il est recommandé d’utiliser le temps d’activation le plus court possible, car l’activation peut affecter l’efficacité du transfert des gels mPAGE® Lux.

Technologie « Stain-Less » avec activation au TCE

Comme cette méthode d’activation au TCE ne nécessite pas d’étape de coloration supplémentaire, elle permet de gagner du temps et peut être réalisée immédiatement après l’électrophorèse. Les résultats présentés ici montrent également que la sensibilité de la détection des protéines est similaire à celle d’autres méthodes conventionnelles utilisant la coloration.

Dans l'ensemble, l'utilisation des gels mPAGE® Lux et d'autres produits d'électrophorèse mPAGE® vous permet de préparer et de réaliser des gels rapidement et de manière reproductible. De plus, les gels mPAGE® Lux sont compatibles avec la technologie « sans coloration » décrite ici et utilisant le TCE, ce qui réduit encore davantage le nombre d'étapes dans vos protocoles actuels. Les chercheurs disposent ainsi d'un outil précieux leur permettant de continuer à bénéficier de la simplicité et de la flexibilité de la technologie de coulée mPAGE® Lux, tout en profitant désormais de l'avantage supplémentaire d'une visualisation rapide des protéines.

Commandez le système de coulée mPAGE® Lux et les réactifs associés