Milieux de séparation cellulaire destinés à la recherche, au diagnostic et aux applications pharmaceutiques

SÉPARATION CELLULAIRE AVEC LE SYSTÈME ACCUSPIN™ ET LE MILIEU HISTOPAQUE^®

Le système ACCUSPIN™, très répandu, associé à l’Histopaque^®-1077, utilise des tubes à centrifuger stérilisés par irradiation, conçus pour créer deux compartiments distincts séparés par une barrière poreuse en polyéthylène haute densité (« fritté »). Ce système permet d’ajouter du sang total anticoagulé dans le compartiment supérieur sans risque de mélange avec le milieu de séparation Histopaque^® présent dans le compartiment inférieur. Le milieu de séparation Histopaque^® à densité graduée permet une séparation nette des lymphocytes et des cellules mononucléaires (c'est-à-dire les monocytes). Les érythrocytes s’agrègent et les granulocytes deviennent légèrement hypertoniques, ce qui augmente leur vitesse de sédimentation et entraîne leur précipitation au fond du tube ACCUSPIN™. Une fois le processus de séparation terminé, les cellules isolées peuvent être caractérisées plus en détail, mises en culture, analysées ou utilisées dans des applications en aval telles que la cytométrie en flux, les tests cellulaires, l’analyse moléculaire, le développement de produits pharmaceutiques ou de thérapies cellulaires.

MÉDIUMS À GRADIENT IODÉS HISTOPAQUE^®

Les milieux Histopaque^® sont conçus pour séparer différents types de cellules en fonction de leur densité et sont couramment utilisés dans la recherche pharmaceutique et biomédicale pour l’isolement et la purification de populations cellulaires spécifiques. Les milieux Histopaque^® sont des solutions de polysucrose et de diatrizoate de sodium, filtrées à stérilité et testées pour les endotoxines, ajustées à des densités précises. Ces milieux de séparation prêts à l’emploi facilitent la récupération rapide et optimale de cellules viables à partir de petits volumes de sang total. Les milieux de séparation Histopaque^® sont généralement utilisés dans des applications telles que : L'isolement des cellules mononucléaires du sang périphérique (PBMC) : les milieux Histopaque^® sont souvent utilisés pour isoler les PBMC à partir d'échantillons de sang total. Les PBMC sont constituées de lymphocytes, de monocytes et d’autres cellules nucléées. En superposant le milieu Histopaque^® entre l’échantillon de sang et un tube à centrifuger, la centrifugation provoque la séparation des PBMC des autres composants sanguins, tels que les globules rouges et les plaquettes. Fractionnement cellulaire : les milieux Histopaque^® peuvent être utilisés pour fractionner des populations cellulaires mixtes en couches distinctes en fonction de leur densité. En superposant le milieu de séparation dans un tube à centrifuger et en y ajoutant soigneusement la suspension cellulaire, la centrifugation entraîne la formation de couches distinctes représentant différents types de cellules. Cette technique est utile pour séparer et purifier des cellules en vue d’analyses ou d’expérimentations ultérieures. Isolation de types cellulaires spécifiques : les milieux de séparation Histopaque^® peuvent être utilisés pour isoler des populations cellulaires spécifiques en fonction de leur densité ou de marqueurs spécifiques. En superposant soigneusement le milieu de séparation et la suspension cellulaire, la centrifugation permet de séparer les cellules d’intérêt des cellules indésirables. Cette technique est particulièrement précieuse pour les chercheurs qui étudient des types cellulaires spécifiques ou qui cherchent à enrichir des populations cellulaires rares. Fabriqués selon le système de gestion de la qualité ISO 9001, les produits Histopaque^®, soumis à des tests de performance spécifiques à chaque lot, garantissent une séparation sélective constante des lignées cellulaires sanguines, une séparation optimale des cellules viables et non déformées, ainsi qu’une interférence minimale des cellules étrangères.

MÉDIAS À BASE DE SILICE COLLOÏDALE PERCOLL^®

Les milieux à base de silice colloïdale sont des suspensions colloïdales de particules de silice enrobées de polyvinylpyrrolidone (PVP), d’un diamètre compris entre 15 et 30 nm, généralement utilisées dans la recherche biomédicale et pharmaceutique pour la séparation et la purification cellulaires. La PVP réduit les interactions entre les particules et le matériel biologique et stabilise le colloïde dans une solution saline isotonique. Sa densité peut être ajustée en modifiant la concentration de la solution Percoll^®, ce qui permet aux chercheurs de personnaliser le gradient en fonction de leurs besoins spécifiques de séparation. Nos milieux colloïdaux Percoll^® présentent une force osmotique extrêmement faible qui varie très peu en fonction de la densité. De plus, l’osmolalité des gradients formés par centrifugation s’ajuste facilement en ajoutant une quantité appropriée de saccharose ou de solution tampon. Les gradients Percoll^® sont idéaux pour les séparations isopycniques de cellules, d’organites, de vésicules membranaires et même de certains virus.

SELS INORGANIQUES

Les milieux à gradient ionique, également appelés gradients ioniques ou solutions ioniques, sont utilisés dans les techniques de séparation cellulaire pour séparer les cellules en fonction de leur charge de surface ou de leurs propriétés électriques. Ces milieux créent un champ électrostatique ou un différentiel de charge, ce qui permet la séparation de cellules présentant des charges de surface différentes. Parmi les techniques de séparation cellulaire utilisant des milieux à gradient ionique, on peut citer l’électrophorèse, la diélectrophorèse (DEP) et la focalisation isoélectrique (IEF). Le choix spécifique du milieu et de la technique dépend de la nature des cellules à séparer, du mécanisme de séparation souhaité et des objectifs expérimentaux globaux. Nos milieux à gradient ionique, composés de sels de métaux lourds concentrés, sont exclusivement utilisés pour les séparations isopycniques d’acides nucléiques. Le chlorure de césium et le sulfate de césium sont les sels de métaux lourds les plus couramment utilisés, avec des densités de gradient pouvant atteindre 1,91 g/cm³. Parmi les autres sels utilisés, on trouve l’iodure de sodium, le bromure de sodium et les sels de rubidium. La sélection et la conception des milieux à gradient ionique et des techniques associées nécessitent une prise en compte minutieuse de facteurs tels que le pH, la conductivité, la composition du tampon et les propriétés électriques des cellules étudiées.

MILIEUX À GRADIENT DE DENSITÉ IODÉS NON IONIQUES

Les milieux de gradient de densité iodés non ioniques sont des substances spécialisées utilisées pour les techniques de séparation et de purification dans divers domaines, notamment la biologie, la biochimie et le diagnostic clinique. Ces milieux sont généralement à base de composés iodés qui forment des gradients de densité, permettant la séparation des particules en fonction de leur densité. Les milieux à gradient de densité iodés non ioniques fonctionnent selon le principe de la centrifugation à gradient de densité. La structure de la plupart des composés iodés utilisés dans les milieux à gradient de densité courants repose sur des composés tels que l’acide triiodobenzoïque, auquel est attaché un groupe hydrophile afin d’augmenter leur solubilité et de former un gradient de densité continu en solution aqueuse. Nous proposons des solutions d’iohexol plus denses (par exemple, Nycodenz^® et Histodenz™) qui minimisent la déshydratation des particules biologiques. L’iohexol est non toxique et n’est pas métabolisé par les cellules mammifères.

ALCOOLS POLYHYDRATIQUES

Notre gamme de milieux de gradient non ioniques à base d’alcools polyhydriques comprend des gradients de saccharose largement utilisés pour la séparation par zones de vitesse des macromolécules et pour la séparation isopycnique des virus et des organites cellulaires. Parmi leurs avantages figurent leur stabilité, leur inertie et leur faible coût ; leurs inconvénients résident quant à eux dans la nature concentrée et hypertonique de la solution. Nous proposons également une solution de glycérol dont la densité est inférieure à celle des solutions de saccharose correspondantes, ce qui permet d’inhiber l’activité de certaines enzymes tout en facilitant l’élimination par aspiration.

POLYSACCHARIDES

Nous fournissons le milieu à base de polysaccharide le plus couramment utilisé, le Ficoll^®, afin de contourner les problèmes liés à la forte pression osmotique résultant de l’utilisation de solutions de saccharose. Les polymères synthétiques Ficoll^® sont des poly(éthylène glycol) (PEG) enrobés de polyvinylpyrrolidone, couramment utilisés pour préparer des solutions à gradient de densité. Les solutions Ficoll^® sont largement utilisées dans diverses applications biologiques et biochimiques, en particulier pour la séparation et l’isolement cellulaires. Cette solution est obtenue par polymérisation de molécules de saccharose avec de l’épichlorhydrine, ce qui donne un polysaccharide dont le poids moléculaire moyen est de 400 000. Les solutions de Ficoll^® inférieures à 20 % (p/v) ont une densité de 1,07 g/cm³ et sont considérées comme osmotiquement inertes. Le principal inconvénient de la solution Ficoll^® réside dans sa viscosité plus élevée que celle des solutions de saccharose comparables. Les solutions Ficoll^® jouent un rôle important dans divers processus de recherche et développement pharmaceutiques, facilitant l’isolement, la purification et la caractérisation des cellules, des virus et d’autres composants biologiques, contribuant ainsi aux progrès de la découverte de médicaments, de l’immunothérapie et d’autres applications pharmaceutiques. Elles sont couramment utilisées dans les techniques de séparation cellulaire, en particulier pour isoler les cellules mononucléaires du sang périphérique ou d’autres sources cellulaires. En superposant la suspension cellulaire sur un gradient de densité Ficoll^® et en la centrifugeant, les cellules d'intérêt, telles que les lymphocytes ou les monocytes, peuvent être séparées des autres types de cellules et des composants indésirables comme les globules rouges et les granulocytes. Les solutions Ficoll^® sont également utilisées dans la centrifugation en gradient de densité, une technique qui sépare les particules ou les molécules en fonction de leur densité de flottabilité. Au cours de la centrifugation, les particules ou les cellules migrent à travers le gradient de Ficoll^® et se déposent à des positions correspondant à leurs densités respectives. Cela permet la séparation et le fractionnement des différents composants présents dans un mélange hétérogène.