Fenol – cloroformo – mezcla de alcohol isoamílico

La mezcla de fenol-cloroformo-alcohol isoamílico (mezcla PCI) es una mezcla muy utilizada en investigación en biología molecular y bioquímica, diseñada específicamente para la purificación de ácidos nucleicos, como el ADN y el ARN. Con su composición esencial de 25 % de fenol, 24 % de cloroformo y 1 % de alcohol isoamílico, la mezcla PCI desempeña un papel fundamental en la separación de proteínas y ácidos nucleicos durante el proceso de purificación. El fenol desnaturaliza las proteínas, el cloroformo crea una capa nítida para atraparlas y el alcohol isoamílico facilita la separación clara de estas capas, permitiendo el aislamiento del ADN o el ARN purificados en la fase acuosa.
Las aplicaciones de la mezcla PCI son diversas, y abarcan el aislamiento del ARN, donde extrae de manera eficaz el ARN de los tejidos animales y vegetales para análisis posteriores como la transcripción inversa y los estudios de expresión génica. Además, la mezcla PCI también ha demostrado ser fundamental en la extracción del ADN, lo que permite una recuperación eficiente para diversas aplicaciones, como las huellas genéticas ubicadas en los minisatélites del ADN para la identificación genética. Como técnica de purificación general, la mezcla PCI garantiza preparaciones de gran calidad tanto de ADN como de ARN para futuras investigaciones.

La mezcla de fenol − cloroformo − alcohol isoamílico se ha utilizado en la extracción de ácidos nucleicos del tejido de los conductos biliares, de Drosophila , de inmunoprecipitados de cromatina y ARN en Caenorhabditis elegans y del ADN mitocondrial.Además, también se ha utilizado en la extracción de ADN para la generación de las huellas genéticas ubicadas en los minisatélites del ADN

Cuando los ácidos nucleicos se extraen con la disolución de mezcla fenol-cloroformo-alcohol isoamílico, se consigue una separación clara de los componentes. Las proteínas presentes en la muestra se desnaturalizan y eliminan (recogidas en la fase orgánica o en la interfase), mientras que los ácidos nucleicos permanecen en la fase acuosa. El cloroformo desnaturaliza las proteínas y facilita la separación de las fases acuosa y orgánica, y el alcohol isoamílico reduce la formación de espuma durante la extracción.

mezcla de fenol, cloroformo, alcohol isoamílico en la proporción de 25:24:1 (v/v/v), saturada con TRIS 100 mM a pH 8,0; contiene 8-hidroxiquinolina a ~ el 0,1 %

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