TR-1003
聚乙烯感染/转染试剂
A highly efficient method of gene transfer into mammalian cells leveraging infection with retroviral vectors.
别名:
1,5-二甲基-1,5-二氮杂十五甲基多溴化物, 海美溴铵
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关于此项目
Application
方法：逆转录病毒感染
重组逆转录病毒储液是通过将 5ml 生长培养基（含 5％ 血清）添加接近汇合的转染的逆转录病毒包装细胞单层细胞的 100mm 平板中来制备的。24 小时后，去除培养基，并通过 0.45um 过滤器过滤。
将要感染该重组逆转录病毒储液的细胞以每个 100mm 平板 500,000 个细胞的量接种在 10ml 完全培养基中。
24 小时后，去除细胞的生长培养基。用 2ml 的病毒上清液（或将病毒储液稀释至 2ml）感染细胞，每毫升添加 5ug 至 10ug 的聚凝胺（最终浓度），在 37°C 下孵育细胞 3 到 6 小时。
加入 8 ml 完全培养基。感染三天后，将细胞按 1：5 的比例分进选择培养基。
方法：转染
将细胞铺在完全生长培养基中，约有 50％ 汇合。
铺板后 18 至 24 小时，立即使用以下方法制备 DNA-培养基-聚凝胺溶液：
注意：必须按照正确的顺序添加每个组件。
1：完全生长培养基（60mm 平板，2ml；
100mm 平板，3ml），加热至 37°C。
2：质粒 DNA，10ng 至 10ug。轻轻混合。
3：聚凝胺的最终浓度为每毫升 5ug 至 10ug。轻轻混合
从平板中去除培养基，并将 DNA-培养基-聚凝胺溶液添加到细胞中。让细胞在 37°C 下孵育 6 到 20 小时，前 6 个小时大约每 1.5 个小时轻轻摇动一次。
去除 DNA-培养基-聚凝胺溶液，并用 DMSO 储液轻轻覆盖细胞（在 1X HBSS 中的 15％ DMSO：专门培养基（货号 S-051-D）每个 60 mm 平板 3 ml，每个 100 mm 平板 4 ml。手动摇动培养皿 10 秒钟，使溶液均匀分布，然后将细胞置于 37°C 下温育 4 分钟。
立即去除 DMSO 储液，并用完全生长培养基轻轻冲洗细胞两次，每个 60 mm 培养皿每次洗涤用 5 ml，每个 100 mm 培养皿每次洗涤用 10 ml
将完全生长培养基添加到细胞中。
若要获得稳定的转化子，则去除生长培养基，并将细胞按 1：5 比例分进选择培养基。
若要瞬时表达，去除生长培养基并添加新鲜的生长培养基。24 至 72 小时后收获细胞和/或培养基。
提供的试剂通过0.2μm膜过滤并用无菌H2O水化。
Physical form
Preparation Note
Disclaimer
存储类别
12 - Non Combustible Liquids
flash_point_f
Not applicable
flash_point_c
Not applicable
实验方案
产生人诱导多能干细胞（iPSC）的干细胞重编程实验方案，包括基于病毒和非病毒RNA的方法。
Stem cell reprogramming protocols to generate human induced pluripotent stem cells (iPSCs) including viral and non-viral RNA based methods.
商品
High titer lentiviral particles for LC3 variants used for live cell analysis of cellular autophagy.
High titer lentiviral particles including beta-actin, alpha-tubulin and vimentin used for live cell analysis of cytoskeleton structure proteins.
包含β-肌动蛋白、α-微管蛋白和波形蛋白用于细胞骨架结果蛋白活细胞分析的高滴度慢病毒颗粒。
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KOD One™ PCR Master Mix overview for ultra-fast PCR with high specificity, fidelity, and yield
Expression of genetically-encoded fluorescently-tagged proteins has widely been employed for real-time visualization of cellular behavior and trafficking. Prepackaged, ready-to-use, high-titer lentiviral particles (which we have termed “lentiviral biosensors”) encoding GFP- or RFP-tagged proteins are a convenient, robust solution for fluorescent imaging of transduced cells. Compared to other nonviral transfection methods, lentiviral transduction, in many cases, offers higher transfection efficiency and more homogeneous protein expression, particularly for traditionally hard-to-transfect primary cell types. Lentiviral biosensors are ideal for use with fixed and live cell fluorescent microscopy, and are non-disruptive towards cellular function. GFP- or RFP-protein localization matches well with antibody-based immunostaining and demonstrates altered patterns of expression upon treatment with modulators of cell function and phenotype. Lentiviral biosensors provide a broadly effective, convenient method for visualization of cell behavior under a variety of physiological and pathological treatment conditions, in both endpoint and real-time imaging modalities. In this study, we focus on lentiviral biosensors containing GFP-LC3 and RFP-LC3 for the study of autophagosome formation.
全球贸易项目编号
| 货号 | GTIN |
|---|---|
| TR-1003-G | 04053252398025 |