Pruebas de carga biológica

 Fundamentos de las pruebas de biocarga

Las pruebas de biocarga o pruebas microbianas son un proceso de control de calidad que detecta y cuantifica la contaminación microbiana de un producto en diferentes etapas de la producción, es decir, desde la fabricación inicial hasta la distribución final. Un control de calidad eficaz y unos resultados precisos de las pruebas son esenciales para minimizar los riesgos para los consumidores y son exigidos por los entornos de producción regulados. Por lo tanto, el análisis de la biocarga suele incluirse en las pruebas rutinarias para garantizar la seguridad, la calidad y el cumplimiento normativo de cada lote de productos fabricados.

Las pruebas de biocarga se realizan para productos sanitarios, productos farmacéuticos, alimentos y bebidas, agua, envases, materias primas, tejidos humanos, tejidos animales y cosméticos. Cuando se siguen métodos estándar, como los que se describen a continuación, es importante asegurarse de que el método de ensayo no introduce bacterias en la muestra de ensayo ni mata las bacterias presentes en la muestra de ensayo.

• Método de filtración de membrana para pruebas de biocarga
• Método de placa directa para pruebas de biocarga
• Método del número más probable (NMP) para pruebas de biocarga

Método de filtración por membrana para pruebas de biocarga

La filtración por membrana es el método de elección para productos que contienen sustancias antimicrobianas. En este método, la muestra se hace pasar a través de un filtro de membrana con un tamaño de poro de 0,45 µm. La membrana funciona como una barrera y captura los microorganismos más grandes que el tamaño del poro de la membrana. Durante la filtración, se puede utilizar el vacío para acelerar el proceso. A continuación, la membrana se transfiere a un medio de cultivo y se coloca en una incubadora durante al menos 5 días a 30-35 °C para la detección de bacterias y a 20-25 °C para la detección de hongos. El cultivo resultante se enumera posteriormente para determinar los niveles de contaminación microbiana de la muestra. Deben tomarse las medidas apropiadas para evitar la contaminación cruzada que podría dar lugar a resultados falsos positivos.

Métodos de siembra directa para pruebas de biocarga

Los métodos de siembra directa para pruebas de biocarga incluyen los métodos de placa de vertido y placa esparcida. El método de la placa de vertido es el preferido debido a su mayor precisión teórica. En el método de la placa de vertido, el medio de cultivo esterilizado se añade a una placa de Petri que contiene la muestra de ensayo y se deja solidificar. Por el contrario, en el método de la placa esparcida, la muestra se añade a una placa de Petri que contiene un medio de cultivo estéril y solidificado. Independientemente del método, una vez añadida la muestra al sistema de cultivo, se incuba la placa y se enumera el cultivo resultante.

Método del número más probable (NMP) para pruebas de carga biológica

El método del número más probable (NMP) es un método cuantitativo utilizado para determinar la concentración bacteriana aproximada en una muestra. La solución o muestra original se subdivide por órdenes de magnitud (frecuentemente 10× o 2×) en caldo de cultivo y se evalúa la presencia o ausencia de microorganismos. El inconveniente del método NMP es que requiere un gran número de réplicas con la dilución adecuada para reducir los intervalos de confianza. Además, el método sólo es eficaz para el examen de bacterias y no proporciona resultados fiables para el recuento de hongos.