Anticuerpo anti-NeuN, clon A60

46/48 kDa

El anticuerpo anti-NeuN (núcleos NEUronales; clon A60) reconoce específicamente la proteína NeuN, específica de las neuronas que se une al ADN, que está presente en la mayor parte de los tipos de células neuronales del SNC y el SNP de todos los vertebrados estudiados. La distribución de la proteína NeuN está aparentemente restringida a los núcleos neuronales, a los cuerpos celulares y algunos procesos neuronales proximales en el cerebro fetal y adulto, aunque algunas neuronas no son reconocidas por el NeuN a todas las edades: las células retinianas INL, las células de Cajal-Retzius, las células de Purkinje, las neuronas del núcleo dentado y olivar inferior, y las células de los ganglios simpáticos son ejemplos (Mullen et al., 1992; Wolf et al., 1996). La proteína NeuN inmunohistoquímicamente detectable aparece primero en las etapas del desarrollo que se corresponden con la retirada de las neuronas del ciclo celular o con el comienzo de la diferenciación terminal de la neurona (Mullen et al., 1992). La inmunorreactividad aparece en torno a E9.5 en el tubo neuronal de ratón y se extiende por todo el sistema nervioso en desarrollo para E12.5. Una fuerte tinción nuclear sugiere una función proteica reguladora nuclear; sin embargo, en la actualidad no existen pruebas de si el antígeno NeuN tiene alguna función en el citoplasma distal o si simplemente es sintetizada allí antes de ser transportada de vuelta al núcleo. No se han encontrado diferencias entre la proteína aislada de núcleos purificados y la procedente de extractos cerebrales completos mediante inmunotransferencia (Mullen et al., 1992).

Núcleos celulares purificados de cerebro de ratón

Análisis de inmunotransferencia Western:
Un lote anterior de este anticuerpo reconoció 2-3 bandas en el intervalo de 46-48 kDa y posiblemente otra banda aproximadamente a los 66 kDa.

Inmunocitoquímica:
se utilizó una dilución 1:10 -1:100 de un lote anterior. Las neuronas en cultivo deben permeabilizarse con Tritón X-100 al 0,1%. Todas las diluciones de los anticuerpos primarios deben realizarse con disoluciones simples que contengan sólo el amortiguador y el anticuerpo primario sin un exceso de proteínas de bloqueo ni de detergentes.

Inmunohistoquímica:
1:100- 1:1000. El anticuerpo funciona mejor en tejido incluido en cera de poliéster, pero también funciona en tejido incluido en parafina a una menor dilución de trabajo. El anticuerpo funciona bien con fijadores que contengan formaldehído. Se ha utilizado el tratamiento con ácido cítrico y microondas de manera satisfactoria (Sarnat, 1998).

Análisis de inmunohistoquímia (parafina): Se utilizó un lote anterior para IH(P).

El usuario final debe determinar las diluciones de trabajo óptimas.

Categoría investigación
Neurociencia

El anticuerpo anti-NeuN, clon A60, detecta la concentración de NeuN y se ha publicado y validado para ser utilizado en FC, IC, IF, IH, IH(P), IP y WB.

Subcategoría investigación
Marcadores neuronales y de la glía

El anticuerpo monoclonal exclusivo de MILLIPORE frente a la proteína nuclear específica de las neuronas de vertebrados denominada NeuN (o Núcleos Neuronales) reacciona con la mayor parte de tipos celulares del sistema nervioso de ratones: cerebelo, corteza cerebral, hipocampo, tálamo, médula espinal y neuronas del sistema nervioso periférico, como los ganglios dorsales, los ganglios de la cadena simpática y los ganglios entéricos. Desde el punto de vista de desarrollo, la inmunorreactividad se observa por primera vez poco después de que las neuronas se hayan vuelto posmitóticas; no se observado tinción en las zonas proliferativas. La tinción inmunohistoquímica se localiza fundamentalmente en el núcleo de las neuronas con una tinción más clara en el citoplasma. Los pocos tipos de células no reactivas con MAB377son las células de Purkinje, las células mitrales y los fotorreceptores. El anticuerpo es un excelente marcador para las neuronas en cultivos primarios y en las células P19 estimuladas con ácido retinoico. También es útil para la identificación de neuronas en los trasplantes.

Inmunoglobulina IgG1 de ratón purificada en disolución tampón que contenga tampón fosfato 0,02 M, NaCl 0,25 M, a pH 7,6 con azida sódica al 0,1%.

Presentación: Purificado

Proteína A purificada

Estable durante 6 meses entre 2 y8ºC desde la fecha de recepción.

Control
Control positivo - tejido cerebral Control negativo - cualquier tejido no neuronal, por ejemplo, los fibroblastos

Evaluado sistemáticamente mediante inmunohistoquímica en tejido cerebral

Análisis mediante inmunohistoquímia (parafina):
Patrón de tinción/morfología del NeuN (ref. # MAB377) en cerebelo de rata. Tejido pretratado con citrato, pH 6,0. Este lote de anticuerpo fue diluido 1:100, utilizando detección IHC-Select con HRP-DAB. La inmunorreactividad se observa como una tinción nuclear en las neuronas de la capa granular. Nótese que no se detecta señal en el núcleo de las células de Purkinje.
Tinción óptima con tampón citrato, pH 6,0, Recuperación del epítopo: Cerebelo de rata

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