Anti-Neurofilament H (200 kDa) Antibody

Los neurofilamentos son un tipo de filamento intermedio que sirven como elementos principales del citoesqueleto, que sostiene el axoplasma. Son los componentes fibrilares más abundantes del axón, siendo en promedio 3-10 veces más frecuentes que los microtúbulos axonales. Los neurofilamentos (10 nm de diám.) están constituidos por tres protofibrillas entrelazadas que se componen a su vez de dos tetrámeros de proteínas monómeras, los protofilamentos. Las proteínas triplete del neurofilamento (68/70, 160 y 200 kDa) se encuentran tanto en el sistema nervioso central como en el periférico y suelen ser específicas de las neuronas. La proteína NF-L de 68/70 kDa puede autoensamblarse en una estructura filamentosa; sin embargo, las proteínas NF-M de 160 kDa y NF-H de 200 kDa requieren la presencia de la proteína NF-L de 68/70 kDa para co-ensamblarse. Los Neuromas, los ganglioneuromas, los gangliogliomas, los ganglioneuroblastomas y los neuroblastomas se tiñen positivamente para los neurofilamentos. Aunque típicamente restringidos a las neuronas, los neurofilamentos se han detectado en paragangliomas y feocromocitomas suprarrenales y extrarrenales. Los carcinoides, los carcinomas neuroendocrinos de la piel y los carcinomas de células en avena del pulmón también expresan neurofilamentos. Para obtener más información sobre los neurofilamentos, consulte la tabla de marcadores específicos de tipo de célula del sistema nervioso en línea en la sección de asistencia técnica de CHEMICON.

Segmento de cola carboxi terminal de cadena H porcina enzimáticamente desfosforilada.

Categoría de investigación
Neurociencia

Este anticuerpo anti-neurofilamento de 200 kDa, clon N52, está validado para utilizar en WB e IH para la detección del neurofilamento de 200 kDa.

Inmunotransferencia Western: 5- 10 μg/ml

Inmunohistoquímica: 5-10 μg/ml

El usuario final debe determinar las diluciones de trabajo óptimas.

Inmunohistoquímica: El anticuerpo N52 reacciona con un fragmento del brazo lateral NF-200 que se encuentra en el extremo del dominio MPR KSP y que contiene el sitio de fosforilación de consenso cdk-5, sin embargo, esta reactividad se elimina si el fragmento NF-200 es fosforilado por cdk-5 {Guidato et al, 1996}. Por lo tanto, para una tinción y reactividad más completas, incluidas las transferencias werstern, se sugiere que las muestras se traten con fosfatasa alcalina antes de la tinción de anticuerpos. Se sugiere el siguiente protocolo de tratamiento:



Protocolo Preparación de las disoluciones:

I. TBS: Tris-HCl, 0,1 mol/l; NaCl, 0,1 mol/l′ pH 8,0.

II. Mezcle la fosfatasa alcalina, 1 mg/ml con 1 mol/l de ZnSO4, 1mol/l MgCl2 y 1mmol/l PMSF; y disuelva en TBS.

NOTA: Es necesario dializar la fosfatasa alcalina contra la disolución I antes de su uso.

Procedimiento:

Los cortes congelados de las muestras de tejido congeladas por choque se secan al aire y luego se fijan con acetona durante 10 minutos a -20°C. Se deja evaporar el exceso de acetona a temperatura ambiente. Incube los cortes en las disoluciones II durante 4 horas a +30 °C y lávelos en TBS 3 veces durante 5 minutos cada una. Los cortes de control negativo se incuban en la disolución II sin fosfatasa alcalina. Tratamiento adicional como siguiente:

- Cubra la preparación con 10-20 μl de disolución de anticuerpos e incube durante 1 hora en una cámara húmeda.

- Sumerja el portaobjetos en TBS y lávelo en TBS 3 veces durante 5 minutos cada una.

- Cubra la preparación con 10-20 μl de una disolución de anticuerpo Ig anti-ratón, marcado con isotiocianato de fluorosceína, e incube en una cámara húmeda a 37°C durante 1 hora.

- Lave el portaobjetos en TBS 3 veces durante 5 minutos cada una.

Subcategoría de investigación
Neurofilamentos y metabolismo neuronal

Marcadores neuronales y gliales

MAB5266 reacciona con la cadena H fosforilada y desfosforilada del neurofilamento de 200kDa (NF-H) en tejidos/extractos normales (Shaw, 1986). MAB5266 se puede utilizar para detectar células de origen neuronal por inmunohistoquímica e inmunotransferencia western. Se ha informado que la reactividad de MAB5266 con NF-H está bloqueada en las células que sobreexpresan cdk-5 (Guidato, 1996).

Inmunoglobulina purificada (cromatografía de intercambio iónico). Líquido en tampón de fosfato 0,02 M, NaCl 0.25M con azida sódica al 0,1 %, pH 7,6

Presentación: Purificada

Conservar a 2-8°C en alícuotas no diluidas durante un máximo de 6 meses. Evite ciclos repetidos de congelación y descongelación.

Concentración: Para conocer la concentración específica del lote, consulte el certificado de análisis.

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