Dispasa^® II

La enzima puede disolverse inicialmente en Hepes/KOH 50 mM pH 7,4, NaCl 150 mM a 10 mg/ml Deben realizarse más diluciones en los medios de cultivo celular más apropiados para que las células se disocien. La dispasa es una metaloproteinasa y es activada por cationes divalentes, como el Ca2⁺, el Mg2⁺, el Mn2⁺ y el Fe2⁺.

La enzima de Sigma se ha utilizado en el desarrollo de un protocolo para el cultivo ex vivo de botones mamarios embrionarios de ratón. Se ha utilizado en el tratamiento de fragmentos de corazón de rata durante el aislamiento de las mitocondrias del corazón de rata. Se ha utilizado también para el aislamiento de células madre de la pulpa dental (DPSC) mediante hidrólisis enzimática. Estas células se han comparado con las DPSC aisladas mediante el método de explante para analizar sus propiedades de células madre y de diferenciación.
La Dispase^® II se ha utilizado para la clasificación de células activadas por fluorescencia (FACS). Se ha utilizado también para la separación de las capas del saco vitelino visceral.
Adecuada para utilizar en la preparación de suspensiones monocelulares para secuenciación.

Dispase^®II es una proteasa neutra que hidroliza los enlaces peptídicos N-terminales de restos de aminoácidos no polares. Puede utilizarse para separar muchos tejidos y células en crecimiento in vitro. La enzima es muy suave y no daña las membranas celulares. También puede utilizarse para evitar la aglutinación en los cultivos en suspensión. Esta proteasa escinde la fibronectina y el colágeno de tipo IV, pero no la laminina, el colágeno de tipo V, la seroalbúmina ni la transferrina. Dispase^® II es específica para la rotura de los enlaces leucina-fenilalanina. El Ca²⁺, el Mg²⁺, el Mn²⁺, el Fe²⁺, el Fe³⁺ y el Al³⁺ activan la enzima. El EDTA, el EGTA, el Hg²⁺ y otros metales pesados inhiben la actividad de la enzima. La enzima contiene un átomo gramo de cinc por mol gramo de enzima purificada. Si se elimina el componente cinc con quelantes como el EDTA o el EGTA, se obtiene una apoenzima inactiva. La enzima no es inhibida por el suero.

Una unidad hidrolizará la caseína para producir color equivalente a 1,0 μmol (181 μg) de tirosina por minuto a pH 7,5 a 37 °C (color por el reactivo Folin-Ciocalteu, salvo que se indique otra cosa).

polvo liofilizado que contiene acetato de calcio y lactosa

Puede prepararse una disolución de reserva de 50 U/ml mediante la disolución del polvo en un tampón que contenga NaAc 10 mM (pH 7,5) y CaAc 5 mM. Debe conservarse a 4 °C.

Dispase is a registered trademark of Godo Shusei Co., Ltd.