Cas9 mRNA

In-vitro転写により生成されたCas9 mRNAで、キャッピングとポリAテール付加が施されています。 このmRNAは、精製されたガイドRNAと併用する必要があります。 プラスミドコンストラクトではなくRNAを使用することで、プロモーター-胚の適合性に関わる複雑さや、ヌクレアーゼ及びgRNA発現プラスミドの宿主動物ゲノムへのランダムな組込みの可能性が回避されます。

機能ゲノミクス／遺伝子導入用途

• 遺伝子導入用途における遺伝子ノックアウトの作成
• プロモーター、融合タグ、あるいはレポーターを内在性遺伝子に組み込んだノックイン動物の作成

CRISPR/Cas系は、細菌及び古細菌において、侵入するウイルスやプラスミドに対する防御として働いています。近年、単一Cas9タンパク質とノンコーディングのガイドRNA（gRNA）という2つの分子成分を用いて、真核細胞系で機能する、細菌Streptococcus pyogenes由来のII型CRISPR/Cas系が作られています。 Cas9エンドヌクレアーゼを単一gRNAによりプログラムして、希望するゲノム位置でDNA二本鎖切断（DSB）を発生させることができます。ジンクフィンガーヌクレアーゼ（ZFN）によって誘導されるDSBと同様に、細胞は続いて、非相同末端結合（NHEJ）又は相同組換え修復（HDR）のいずれかの内因性DNA修復過程を活性化し、標的DSBを修復します。

遺伝子導入用途にすぐに使えるRNAです。 DNAの部位特異的二本鎖切断を仲介するには、精製されたガイドRNA配列と併用する必要があります。

SigmaのCas9 mRNAは、濃度500 ng/uL（50 uL Cas9 mRNA、キャッピング及びポリA-テール付加）で提供されます。

Sigmaでは、多くのmRNAベースZFN遺伝子導入プロジェクトで成功を収めている手順と同じ高品質のRNA合成手順を実行していますが、お客様の最終の濃度調整した CRISPR RNA試料は、マイクロインジェクションの直前に遠心分離を行い、マイクロインジェクションニードルを詰まらせるおそれのある粒状物質を全て取り除くことを強くお勧めします。

1バイアルに25 ugのCas9 mRNAが含まれています。

ガイドRNA配列は含まれていないことにご注意ください。 こちらは、Custom CRISPR製品タブから別個に購入していただく必要があります。

DNAの二本鎖切断を仲介するためには、ガイドRNA配列のRNAフォーマットを併用する必要があります。

SigmaのCRISPR RNAは、細胞培養への安定した応用のために開発されたものではありませんが、CRISPRヌクレアーゼとペアードニッカーゼ両方にRNAのみのフォーマットを用いて、CEL-I活性の検出に成功した例がいくつかあります。  RNAのみの送達フォーマットは、二本鎖DNAに感受性を示す細胞種（樹状細胞など）や、プロモーター-細胞間に不適合性が認められる場合に、適していると考えられます。

文献で使用されている典型的マイクロインジェクション濃度は、Cas9 mRNAが20～200 ng/uL、gRNAが10～50 ng/uLです。