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Merck

P5147

Protéase from Streptomyces griseus

Type XIV, ≥3.5 units/mg solid, powder

Synonyme(s) :

Actinase E, Pronase E

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About This Item

Numéro CAS:
UNSPSC Code:
12352204
eCl@ss:
32160410
EC Number:
232-909-5
NACRES:
NA.54
MDL number:

Nom du produit

Protéase from Streptomyces griseus, Type XIV, ≥3.5 units/mg solid, powder

biological source

Streptomyces griseus

type

Type XIV

form

powder

specific activity

≥3.5 units/mg solid

solubility

10 mM NaAc (pH 7.5) and 5 mM CaAc: soluble 0.2 mg/mL at 37 °C, clear, colorless to tan

shipped in

wet ice

storage temp.

−20°C

Quality Level

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Features and Benefits

  • très stable dans la gamme de pH comprise entre 5,0 et 9,0 avec une activité optimale à pH 8,8
  • compatible avec de nombreux tampons d′isolement de l′ADN et de l′ARN
  • accepte un large éventail de substrats

General description

Complètement inactivée par chauffage à une température supérieure à 80 °C pendant 15 à 20 minutes.

Other Notes

Une unité hydrolyse la caséine et produit une couleur équivalente à 1,0 μmole (181 μg) de tyrosine par min à pH 7,5 et à 37 °C (couleur obtenue avec le réactif de Folin-Ciocalteu).

Preparation Note

Isolée à partir de milieu de culture de S. griseus.

Analysis Note

Contient de l′acétate de calcium.

Application

Cette enzyme est plus active dans une plage de pH plus élevée que les protéases alcalines connues, présentant une activité protéolytique même dans une solution de NaOH à 0,2 N. Elle s′avère utile pour la protéolyse des protéines insolubles et pour les études structurelles sur les protéines.
La protéase de Streptomyces griseus a été utilisée :
  • pour la digestion du tissu de noyau gélatineux
  • dans la catalyse de la réaction de Mannich à un récipient
  • pour la déprotéinisation de l′amidon
  • dans la digestion de tranches de cerveau pour la dissociation des cellules

La protéase est généralement utilisée pour les procédures d′isolement des acides nucléiques, en réalisant des incubations de 0,5 à 3,0 heures en présence de dodécylsulfate de sodium à 0,2 % et d′EDTA à 10 mM.
La protéase est une enzyme utilisée pour décomposer les protéines par hydrolyse des liaisons peptidiques. Elle est utilisée pour dégrader les protéines, pour étudier les inhibiteurs de protéases et pour évaluer la cinétique d′inactivation thermique. La protéase est utilisée lors des incubations dans les procédures d′isolement des acides nucléiques. La protéase de Streptomyces griseus a été utilisée dans des études de cristallographie et de cinétique du complexe covalent formé par les aldéhydes tétrapeptides et les protéases à sérine.
L′enzyme proposée par Sigma a été utilisée pour la digestion et l′analyse des complexes antithrombine-héparine. Elle a également été utilisée pour l′isolement de l′amidon résistant aux enzymes.

Biochem/physiol Actions

Ce produit est un mélange d′au moins trois activités caséinolytiques et d′une activité d′aminopeptidase. Les enzymes caséinolytiques correspondent à la protéase A de Streptomyces griseus, la protéase B de Streptomyces griseus et la trypsine de Streptomyces griseus. Ce produit peut être utilisé lorsqu′une dégradation extensive ou complète des protéines est nécessaire. Ce mélange est très peu spécifique et peut digérer la caséine jusqu′à l′obtention de >70 % d′acides aminés individuels.
La protéase dégrade les protéines par hydrolyse des liaisons peptidiques. Les protéases sont inactivées par les inhibiteurs à site actif de sérine, comme le fluorure de phényl méthyl sulfonyle (PMSF) et le di-isopropyl-fluorophosphate. La protéase de Streptomyces griseus est un mélange d′au moins trois activités protéolytiques incluant une sérine protéase extracellulaire. Les sérines protéases sont actives sur une large gamme de substrats, et cette activité est attribuée à un site actif composé d′un résidu Asp, un résidu His et un résidu Ser présents dans la molécule. Cette enzyme hydrolyse préférentiellement les liaisons peptidiques du côté carboxylique de l′acide glutamique ou aspartique.
Mélange d′au moins trois activités protéolytiques incluant une sérine protéase extracellulaire. En général, les sérines protéases sont actives sur une large gamme de substrats, et cette activité est attribuée à un site actif composé d′un résidu Asp, un résidu His et un résidu Ser dans la molécule. Cette enzyme hydrolyse préférentiellement les liaisons peptidiques du côté carboxylique de l′acide glutamique ou aspartique.

pictograms

Health hazardExclamation mark

signalword

Danger

Hazard Classifications

Eye Irrit. 2 - Resp. Sens. 1 - Skin Irrit. 2 - STOT SE 3

target_organs

Respiratory system

Classe de stockage

11 - Combustible Solids

wgk

WGK 2

flash_point_f

Not applicable

flash_point_c

Not applicable

ppe

Eyeshields, Gloves, type N95 (US)


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  1. Is Product P5147, Protease from Streptomyces griseus, also described as "Pronase"?

    "Pronase E" is the name given to a group of proteolytic enzymes produced by Streptomyces griseus K-1. At least 10 proteases are in the mixture, five serine-type proteases, two zinc endopeptidases, two zinc leucine aminopeptidases, and one zinc carboxypeptidase.

  2. Does Product P5147, Protease from Streptomyces griseus, contain calcium acetate?

    This product contains calcium acetate buffer salt. The amount of calcium acetate present will vary for each lot number and has been observed to range from 2 - 30% (w/w).

  3. How should Product P5147, Protease from Streptomyces griseus, be reconstituted and how should a stock solution be prepared?

    This product can be dissolved in 0.01 M sodium acetate with 0.005 M calcium acetate at pH 7.5 at 37°C; at 0.2 mg/mL, this yields a clear solution which ranges from colorless to light tan. Calcium ion is recommended for protection from autolysis. The activity of a dilute enzyme solution containing 0.01 to 0.1 M calcium ion was stable over 24 hours at neutral pH at 2-8°C.  Pronase E is stable at 4°C for at least six months.  Stock solutions of 5 to 20 mg/mL in water are usually stored at -20°C.

  4. Under what conditions can Product P5147, Protease from Streptomyces griseus, be used to digest protein?

    For DNA isolation, Pronase E is usually prepared as a stock solution, and prior to storage at -20°C, the solution is first heated to 56°C for about 15 minutes, then incubated at 37°C for 1 hour. This encourages self-digestion, to eliminate DNAse and RNAse contamination. The enzyme is added to a DNA sample (in the presence of 0.5-1%(w/v) SDS to disrupt DNA protein interactions) typically at 250-500 μg protein/mL, then incubated at 37°C for 1-4 hours. For protein hydrolysis, dissolve about 0.2 μmol of protein in 0.2 mL of 50 mM ammonium bicarbonate buffer at pH 8 (or phosphate buffer pH 7). Add Pronase to 1% (w/w) and incubate at 37°C for 24 hours. It may be necessary to add aminopeptidase M at 4% (w/w) and incubate at 37°C for another 18 hours.

  5. Which document(s) contains shelf-life or expiration date information for a given product?

    If available for a given product, the recommended re-test date or the expiration date can be found on the Certificate of Analysis.

  6. How do I get lot-specific information or a Certificate of Analysis?

    The lot specific COA document can be found by entering the lot number above under the "Documents" section.

  7. How do I find price and availability?

    There are several ways to find pricing and availability for our products. Once you log onto our website, you will find the price and availability displayed on the product detail page. You can contact any of our Customer Sales and Service offices to receive a quote.  USA customers:  1-800-325-3010 or view local office numbers.

  8. What is the Department of Transportation shipping information for this product?

    Transportation information can be found in Section 14 of the product's (M)SDS.To access the shipping information for this material, use the link on the product detail page for the product. 

  9. My question is not addressed here, how can I contact Technical Service for assistance?

    Ask a Scientist here.

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