Préparation de milieux de culture microbienne

Types de milieux de culture

Les milieux de culture microbienne doivent offrir des conditions de croissance optimales pour tous les types de micro-organismes ou pour certains types spécifiques. La composition précise d'un milieu dépend des espèces cultivées et de l'objectif visé. Le pH du milieu doit être ajusté en fonction des micro-organismes. Les milieux de culture microbienne sont classés en fonction de plusieurs paramètres, tels que leur composition chimique, leur nature physique et leur fonction. Les types de milieux définis par ces paramètres sont décrits ci-dessous.

Classification des milieux de culture microbienne en fonction de leur composition chimique

Le milieu synthétique (défini) est un milieu dont la composition chimique est définie, couramment utilisé pour cultiver des photoautotrophes, tels que les cyanobactéries et les protistes photosynthétiques. Il est largement utilisé dans la recherche pour étudier le métabolisme des micro-organismes.

Les milieux complexes sont des milieux contenant des composants chimiques non définis, tels que la peptone, l'extrait de viande et l'extrait de levure, qui répondent aux besoins nutritionnels de différents micro-organismes. Ils sont utilisés pour cultiver des microbes exigeants ayant des besoins nutritionnels complexes.

Milieux de culture microbienne en fonction de leur nature physique

Le milieu solide utilise 1 à 7 % d'agar-agar ou 10 à 20 % de gélatine pour solidifier le bouillon liquide. Les milieux solides sont utilisés pour isoler différents microbes les uns des autres, établir des cultures pures, fabriquer des géloses inclinées et réaliser des piqûres d'agar.

Le milieu liquide ne contient aucun agent solidifiant. Après inoculation et incubation, les cellules deviennent visibles sous la forme d'une petite masse ou d'un bouillon trouble.

Milieux de culture microbienne basés sur la méthode de préparation

Les milieux prêts à l'emploi sont des milieux solides ou liquides fournis dans des boîtes, des flacons, des tubes ou d'autres récipients, sous une forme prête à l'emploi ou prête à l'emploi après refusion et ajout de suppléments.

Le milieu préparé à partir de formulations déshydratées disponibles dans le commerce est un milieu sous forme sèche qui nécessite une réhydratation et un traitement avant utilisation, ce qui donne soit un milieu complet, soit un milieu incomplet auquel des suppléments sont ajoutés avant utilisation.

Un milieu préparé à partir de composants individuels estun milieu produit par un laboratoire de microbiologie entièrement à partir de ses ingrédients individuels.

Le milieu à la demande est produit par un système qui maintient un milieu de culture stérile hautement concentré disponible dans un laboratoire pendant plusieurs jours. Par dilution avec de l'eau stérile, il peut produire la quantité requise de milieu prêt à l'emploi à la demande, sans qu'il soit nécessaire de le passer à l'autoclave.

Préparation des milieux de culture microbienne

La préparation des milieux à partir de formulations commerciales déshydratées doit être effectuée en suivant les instructions du fabricant. La formulation des ingrédients de base, tels que les peptones, les extraits de levure, l'agar, les substances tampons et les antibiotiques, est modifiée afin d'obtenir un milieu homogène. La quantité requise de milieu déshydraté ou d'ingrédients individuels est dissoute dans de l'eau distillée par agitation continue, puis chauffée (si nécessaire). Les milieux contenant de l'agar doivent être suffisamment trempés et agités avant d'être chauffés. Le pH doit être ajusté et le milieu est distribué dans des récipients appropriés pour être stérilisé par chaleur humide dans un autoclave. Les substances sensibles à la chaleur (par exemple, les protéines, les enzymes) sont stérilisées à l'aide de filtres à membrane.

Les milieux de culture doivent être conservés à des températures spécifiques afin d'éviter toute modification de leur composition, et leur durée de conservation ne doit pas dépasser la durée de vie du produit. Une préparation et un stockage aseptiques sont essentiels pour protéger les milieux de culture contre les infections microbiennes. La perte d'eau pendant le stockage peut être minimisée par un emballage imperméable et/ou un stockage à 5 °C ± 3 °C. La dégradation chimique, par exemple l'oxydation ou la perte d'antimicrobiens, peut être retardée par une protection contre la lumière, la chaleur et la déshydratation.