Dosages de l'activité enzymatique
Figure 1.Représentation du processus de test de l'activité enzymatique commençant par un donneur de fluorescence et un accepteur d'extinction sur un substrat subissant une coupure enzymatique pour éliminer l'extincteur, montrant une augmentation de l'activité fluorescente qui signale la présence d'une activité enzymatique.
Les tests d'activité enzymatique sont principalement réalisés par des chercheurs afin d'identifier la présence ou la quantité d'une enzyme spécifique dans un organisme, un tissu ou un échantillon. Parmi ces enzymes, on peut citer l'α-amylase, la catalase, la laccase, la peroxydase, le lysozyme et les enzymes rapporteuses phosphatase alcaline et luciférase. Il existe une grande variété de réactifs et de méthodologies permettant d'étudier les interactions spécifiques entre les enzymes et leurs substrats. Le choix d'une solution de workflow appropriée dépend de la sensibilité requise par le chercheur. Les solutions colorimétriques sont utiles pour la détection, tandis que les réactifs à base de fluorescence sont mieux adaptés à la quantification de l'activité enzymatique.
Catégories en vedette
Ressources pour la dissociation tissulaire et le détachement cellulaire, protocoles et gamme complète d'enzymes fiables et largement caractérisées, notamment la trypsine, la collagénase, la papaïne, les nucléases (DNase et RNase), l'hyaluronidase, l'élastase et la protéase XIV.
Les substrats et les enzymes jouent un rôle crucial dans la recherche en sciences de la vie, tant comme outils que comme cibles dans les systèmes de détection. Découvrez nos systèmes de détection des protéines à base d'enzymes pour ELISA, immunohistochimie, western blot et bien d'autres encore grâce à notre gamme diversifiée de substrats et d'enzymes de détection.
Enzymes utilisées dans l'analyse des médicaments, notamment la β-glucuronidase (bêta-glucuronidase) et la sulfatase pour les études sur le métabolisme et le dépistage des médicaments.
Notre gamme de coenzymes de haute qualité facilite de manière fiable le fonctionnement des enzymes et catalyse les réactions pour vos applications de recherche.
Détermination des conditions optimales pour l'activité enzymatique
Bien que de nombreux tests enzymatiques aient été décrits dans la littérature, il est nécessaire d'adapter ces procédures aux exigences spécifiques de l'enzyme étudiée. L'activité spécifique d'une enzyme dépend de nombreux facteurs, notamment le pH, la température, la force ionique et la concentration de tous les composants du test. Pour des conditions telles que le pH, l'activité enzymatique ressemble souvent à une courbe en cloche. L'activité la plus élevée à un pH spécifique est rapportée comme laVmax, avec une activité décroissante observée à chaque extrémité de la courbe. Certaines enzymes peuvent nécessiter des considérations supplémentaires pour les composés qui ne sont pas directement impliqués dans la réaction, tels que les ions métalliques, les détergents et les molécules hydrophobes.
Détermination des conditions optimales pour l'activité enzymatique
Bien que de nombreux tests enzymatiques aient été décrits dans la littérature, il est nécessaire d'adapter ces procédures aux exigences spécifiques de l'enzyme étudiée. L'activité spécifique d'une enzyme dépend de nombreux facteurs, notamment le pH, la température, la force ionique et la concentration de tous les composants dans le test. Pour des conditions telles que le pH, l'activité enzymatique ressemble souvent à une courbe en cloche. L'activité la plus élevée à un pH spécifique est rapportée comme laVmax, avec une activité décroissante observée à chaque extrémité de la courbe. Certaines enzymes peuvent nécessiter des considérations supplémentaires pour les composés qui ne sont pas directement impliqués dans la réaction, tels que les ions métalliques, les détergents et les molécules hydrophobes.
Composants du test enzymatique
Pour de nombreuses enzymes, l'eau est le solvant standard, car elle correspond à l'environnement aqueux présent dans les cellules. Cependant, des solvants organiques sont utilisés dans certains cas où les enzymes ou les composants enzymatiques sont insolubles dans l'eau. De plus, les substrats et les cofacteurs, qui catalysent les réactions enzymatiques, sont également des composants essentiels d'un test d'activité enzymatique. Les substrats et les cofacteurs sont souvent identifiés en fonction de leurs fonctions dans des conditions physiologiques. À ce titre, les substrats et les cofacteurs interagissent largement et peuvent être nécessaires à un large éventail d'enzymes. Les tampons et les ions sont d'autres éléments essentiels à prendre en compte, car ils sont indispensables pour stabiliser le pH tout au long du test et influencent directement l'activité enzymatique. Par exemple, des ions métalliques mono- ou divalents peuvent être nécessaires à l'activité catalytique des cofacteurs dans la réaction et sont essentiels à l'activité enzymatique.
Réalisation d'un test enzymatique
La préparation des composants du test enzymatique est une première étape pratique. Il est généralement avantageux de préparer un mélange de test volumineux, à l'exception d'un composant activateur, afin d'éviter les erreurs de pipetage inhérentes au pipetage de petits volumes. Une fois le mélange de test préparé, les chercheurs ajoutent le composant activateur final au mélange pour lancer le test d'activité. Le prétraitement des enzymes, qui consiste à les conserver à basse température et à y ajouter souvent divers additifs chimiques ou protéiques, est un facteur essentiel pour garantir la stabilité et l'activité maximale des enzymes avant le début du test. Une fois les matériaux de réaction combinés dans un récipient d'observation, tous les composants doivent être mélangés rapidement et soigneusement dès le début de la réaction. L'enregistrement des données doit commencer immédiatement après le mélange, et le signal détectable du test doit être représenté graphiquement pour toute la durée de la réaction.
Consultez notre moteur de recherche de documents pour trouver des fiches techniques, des certificats et de la documentation technique.
Articles connexes
- Explore compound library screening options with our Pharmacologically Active Compounds portfolio.
- Cholesterol esterification enhances transport efficiency in lipoproteins for increased blood stream transport.
- Complete List of Enzyme Commission Numbers for metabolics research.
- Cathepsin B is a lysosomal cysteine proteinase with broad specificity. This protocol uses Nα–CBZ–Arg–Arg–7–amido–4–methylcoumarin as the substrate for fluorometric detection of Cathepsin B activity.
- Firefly luciferase is a sensitive reporter for gene studies due to its absence in mammalian cells or tissues.
- Tout voir (31)
Protocoles associés
- Cathepsin B is a lysosomal cysteine proteinase with broad specificity. This protocol uses Nα–CBZ–Arg–Arg–7–amido–4–methylcoumarin as the substrate for fluorometric detection of Cathepsin B activity.
- This page provides information about different pull-down assays for the further isolation of multiprotein complexes to identify their components with products from Cytiva.
- Follow our procedure for the determination of alpha-Amylase activity. This enzymatic assay of a-Amylase guides you through the entire process and necessary calculations.
- This procedure may be used for all Catalase products.
- To measure hyaluronidase activity, a turbidimetric determination assay is used at 600 nm. One unit of hyaluronidase activity will cause a change in absorbance of 0.330 per minute at pH 5.35 at 37 °C.
- Tout voir (77)
Trouver d'autres articles et protocoles
Comment pouvons-nous vous aider ?
Si vous avez des questions, veuillez envoyer une demande d'assistance clientèle
ou contactez notre service clientèle :
Envoyez un e-mail à custserv@sial.com
ou appelez le +1 (800) 244-1173
Assistance supplémentaire
- Chromatogram Search
Use the Chromatogram Search to identify unknown compounds in your sample.
- Calculateurs et Applis
Boîte à outils disponible sur Internet - Outils et ressources pour la recherche scientifique en chimie analytique, sciences de la vie, synthèse chimique et science des matériaux.
- Customer Support Request
Support client, y compris l'aide pour les commandes, les produits, les comptes et les problèmes techniques du site Web.
- FAQ
Explore our Frequently Asked Questions for answers to commonly asked questions about our products and services.
Pour continuer à lire, veuillez vous connecter à votre compte ou en créer un.
Vous n'avez pas de compte ?