Kits de dosage immunoenzymatique (ELISA)

ELISA de type « sandwich », « direct » et « compétitif »

Nos tests ELISA constituent une méthode pratique et conviviale pour l’étude des biomarqueurs protéiques solubles dans diverses matrices, notamment le sérum, le plasma, le surnageant de culture cellulaire ou le lysat. Notre gamme de tests ELISA comprend plus de 1 000 tests destinés exclusivement à la recherche, couvrant une grande variété d’espèces, notamment l’humain, la souris, le rat et divers autres modèles animaux (animaux d’élevage et animaux de compagnie). Chaque test est accompagné d’un protocole spécifique et des réactifs nécessaires pour réaliser une analyse sur une plaque à 96 puits. Les tests ELISA se présentent principalement sous la forme de plaques à 96 puits, le fournisseur fournissant les réactifs nécessaires à la détection et à la quantification de la cible. Il existe différentes méthodes ELISA, notamment les méthodes « sandwich », « directe » et « compétitive ».

Le test « sandwich » utilise une paire d’anticorps monoclonaux (mAb) dirigés contre des épitopes différents de la même cible. Le mAb primaire, fixé à la plaque, capture la protéine dans la solution, tandis que le second mAb sert à compléter le « sandwich » et à fournir le signal indiquant la présence de la cible. Une quantité connue de la version recombinante de la protéine est fournie avec le kit, ce qui permet à l’utilisateur d’établir une courbe d’étalonnage à partir de laquelle le signal provenant de l’un des échantillons sera interprété. La majeure partie de notre gamme se présente sous ce format ELISA « sandwich ».

Les tests ELISA directs et compétitifs sont plus rares. Le test direct utilise un seul anticorps monoclonal pour détecter l’échantillon lié à la plaque. L’anticorps monoclonal est ensuite lié par un anticorps secondaire rapporteur afin de fournir le signal.

Dans le test compétitif, une quantité connue du biomarqueur est pré-liée à la plaque. Un anticorps marqué est co-incubé avec l’échantillon ; celui-ci « capte » l’anticorps en fonction de la concentration de la cible dans l’échantillon. L’anticorps libre peut alors se lier à l’antigène présent sur la plaque et produire un signal après élimination de l’échantillon par lavage. Dans ce cas, le signal est inversement proportionnel à la concentration du biomarqueur cible.

Tests ELISA Conferma® et logiciel d’ajustement de courbes d’immunoessais Belysa®

La gamme de tests ELISA Conferma® comprend des tests de type « sandwich » conçus pour minimiser la variabilité d’un lot à l’autre au niveau des réactifs critiques, une préoccupation majeure des utilisateurs de ces tests. L’évaluation de chaque lot de réactifs critiques à l’aide d’une série de techniques analytiques conformes à un protocole détaillé de contrôle qualité (CQ) nous permet de maîtriser et de limiter la variabilité dans le temps.

Afin de permettre aux scientifiques d’évaluer la reproductibilité de leur méthode, nous avons également conçu le logiciel Belysa® d’ajustement des courbes d’immunoessais. Grâce à cet outil, l’utilisateur peut examiner son immunoessai de type « sandwich » pour s’assurer que des paramètres tels que le %CV (coefficient de variation) et le % de récupération correspondent aux attentes. Il peut ensuite comparer les courbes étalons de plusieurs plaques afin de confirmer la cohérence de sa méthode.