Anticorps secondaires
Figure 1.Immunofluorescence. Tissu de granulation exubérant (chair fière) équin coloré à l'aide de l'anti-von Wille.
Nous proposons des anticorps secondaires provenant de diverses espèces hôtes. Nos anticorps secondaires polyclonaux sont produits à partir du sérum d'animaux hôtes tels que les souris, les lapins, les chèvres et les moutons. Nos anticorps secondaires monoclonaux sont produits à partir de clones d'hybridomes de souris.
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Figure 2.Micrographies fluorescentes de cellules pulmonaires mitotiques de triton. Microtubules colorés avec l'anticorps monoclonal anti-^.
Figure 3.Immunocytochimie. Coupe congelée de nerf optique de rat colorée avec l'anti-neurofilament H de souris et l'anti-souris de chèvre CF568 (processus neuronaux, rouge), l'anti-GFAP de lapin et l'anti-lapin de chèvre CF488A, fortement cross-adsorbé (cellules gliales, vert). Les noyaux sont colorés avec RedDot2 (cyan).
Anticorps et sondes conjugués
Nous proposons un large portefeuille d'anticorps conjugués. Un anticorps conjugué est un anticorps monoclonal ou polyclonal lié à une étiquette et utilisé pour la détection dans une large gamme de techniques de dosage. L'utilité spécifique d'un anticorps secondaire dépend de sa ou ses sondes conjuguées. Les sondes sont des molécules qui supportent diverses technologies de détection. Les systèmes de détection les plus courants pour les anticorps secondaires conjugués sont colorimétriques ou fluorescents.
Les essais colorimétriques sont généralement basés sur l'utilisation de la phosphatase alcaline (ALP) ou de la peroxydase de raifort (HRP) ou de ses dérivés. Le système de liaison du conjugué biotine-avidine (streptavidine) est souvent utilisé pour amplifier le signal colorimétrique de l'ALP ou de la HRP. Les tests fluorescents les plus courants utilisent l'isothiocyanate de fluorescéine (FITC), la rhodamine ou son dérivé, l'isothiocyanate de tétraméthylrhodamine (TRITC), la cyanine (Cy3) ou la phycoérythrine (R-PE).
Nous proposons des anticorps conjugués liés à une variété d'étiquettes colorimétriques et fluorescentes pour une utilisation dans des applications de détection, de purification, de tri et de microscopie. Les anticorps conjugués sont produits dans une variété d'animaux hôtes, ce qui les rend compatibles avec une large gamme de réactifs immunochimiques. Pour les utilisateurs dont les recherches nécessitent l'étiquetage de leurs propres réactifs, nous proposons des kits d'étiquetage d'anticorps pour la conjugaison de diverses étiquettes (biotine, FITC, étiquettes CF™) à des anticorps monoclonaux et polyclonaux.
Protéine A, G et L
La protéine A est dérivée de Staphylococcus aureus. La protéine G est dérivée d'une espèce de Streptococcus. Toutes deux possèdent des sites de liaison pour la partie Fc de l'IgG des mammifères. L'affinité de ces protéines pour l'IgG varie en fonction de l'espèce animale. La protéine G a une affinité plus élevée pour les IgG de rat, de chèvre, de mouton et de bovin, ainsi que pour l'IgG1 de souris et l'IgG3 humaine. La protéine A a une affinité plus élevée pour les IgG de chat et de cochon d'Inde (tableau 1). Outre les sites de liaison Fc des IgG, la protéine G native contient des sites de liaison pour l'albumine, la région Fab des IgG et des régions de liaison membranaire, ce qui peut entraîner une coloration non spécifique. Ces problèmes ont été résolus en créant des formes recombinantes de la protéine. La protéine G recombinante a été modifiée pour éliminer la région de liaison à l'albumine, et la protéine G′ recombinante est une protéine tronquée dépourvue des sites de liaison à l'albumine, à la région Fab et à la membrane, tout en conservant le site de liaison Fc, ce qui la rend plus spécifique pour les IgG que la forme native.
La protéine L se lie également à l'IgG de poulet.
Réactifs de détection
Les protéines A et G sont utilisées comme réactif général, non spécifique à une espèce, pour lier les anticorps primaires ou les IgG de surface dans les tissus des mammifères. La protéine G est recommandée pour la plupart des espèces, y compris la souris et le rat. La protéine A est recommandée pour le chat et le cochon d'Inde. Aucune de ces protéines n'est recommandée pour la détection des IgA ou IgM, pour la détection des fragments Fab ou pour la détection des IgG aviaires. Lorsqu'elles sont liées à une résine comme l'agarose, les protéines A et G peuvent être utilisées pour la purification par affinité des immunoglobulines à partir du sérum ou du liquide d'ascite. Elle est particulièrement utile pour la détection des fragments Fab, F(ab′)2 et des fragments scFv recombinants, pour la détection des Igs liés aux récepteurs Fc ou pour la détection des anticorps monoclonaux en présence d'Igs bovins. L'utilisation est limitée à la détection des Igs portant des chaînes légères kappa.
Résines
Les protéines A et G ont des sites de liaison pour la partie Fc de l'IgG de mammifère. La capacité de ces protéines pour les IgG varie selon les espèces. En général, les IgG ont une affinité plus élevée pour la protéine G que pour la protéine A, et la protéine G peut lier les IgG d'une plus grande variété d'espèces. L'affinité de diverses sous-classes d'IgG, en particulier de la souris et de l'homme, pour la protéine A varie davantage que pour la protéine G. La protéine A peut donc être utilisée pour préparer des IgG isotypiquement pures à partir de certaines espèces. La protéine L permet d'isoler des anticorps monoclonaux de souris à partir de surnageants de cultures cellulaires sans contamination par de l'IgG bovine.
Figure 4.CF™ Dye. Cellules HeLa colorées avec de l'anti-tubuline de souris et l'anticorps secondaire anti-souris de chèvre CF488A (microtubules, vert). Les filaments d'actine sont colorés avec la phalloïdine CF640R (violet). Les noyaux sont contre-colorés avec du DAPI (bleu).
CF™ Dye Labeled Antibodies
Les colorants CF™ sont une série de colorants fluorescents hautement solubles dans l'eau couvrant le spectre visible et proche infrarouge (proche IR) pour le marquage des anticorps. Développés par des scientifiques à l'aide de chimies révolutionnaires, la luminosité, la photostabilité et la sélection des couleurs des colorants CF™ rivalisent avec la qualité des autres colorants commerciaux grâce à une conception rationnelle des colorants.
Nous proposons des anticorps secondaires marqués par des colorants CF™ hautement validés dans une variété d'options spécifiques à chaque espèce.
Les colorants CF™ sont des colorants fluorescents hautement solubles dans l'eau couvrant le spectre visible et proche infrarouge.
Ressources connexes
- Article: How to Choose a Secondary Antibody
Review the key factors that should figure in your decision to choose a secondary antibody. Learn about species, subclass, isotype, label, and more.
- Article: Tips for Immunofluorescence Protocols
Immunofluorescence uses antibody-conjugated fluorescent molecules for protein localization, modification confirmation, and protein complex visualization.
- Article: Using Conjugated and Secondary Antibodies
Using conjugated antibodies and secondary antibodies in the lab.
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