Anticorps secondaires
Tissu de granulation exubérant (chair surélevée) d'origine équine, coloré à l'aide d'un anticorps anti-von Wille.
Les anticorps secondaires sont des anticorps polyclonaux ou monoclonaux qui se lient à des anticorps primaires ou à des fragments d’anticorps, tels que les régions Fc ou Fab. Ils sont généralement marqués à l’aide de sondes, ce qui les rend utiles pour des applications de détection, de purification ou de tri.
Nous proposons des anticorps secondaires issus de diverses espèces hôtes. Nos anticorps secondaires polyclonaux sont produits à partir du sérum d’animaux hôtes tels que la souris, le lapin, la chèvre et le mouton. Quant à nos anticorps secondaires monoclonaux, ils sont produits à partir de clones d’hybridomes de souris.
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Micrographies fluorescentes de cellules pulmonaires de triton en mitose. Microtubules marqués à l'aide d'un anticorps monoclonal anti-^.
Coupe congelée du nerf optique de rat marquée avec un anticorps de souris anti-neurofilament H et un anticorps de chèvre anti-souris marqué au CF568 (processus neuronaux, rouge), ainsi qu'un anticorps de lapin anti-GFAP et un anticorps de chèvre anti-lapin marqué au CF488A, fortement cross-adsorbé (cellules gliales, vert). Les noyaux sont marqués avec du RedDot2 (cyan).
Anticorps conjugués et sondes
Nous proposons une large gamme d’anticorps conjugués. Un anticorps conjugué est un anticorps monoclonal ou polyclonal lié à un marqueur et utilisé pour la détection dans diverses techniques d’analyse. L’utilité spécifique d’un anticorps secondaire dépend de la ou des sondes auxquelles il est conjugué. Les sondes sont des molécules qui permettent la mise en œuvre de diverses technologies de détection. Les systèmes de détection les plus courants pour les anticorps secondaires conjugués sont colorimétriques ou fluorescents.
Les dosages colorimétriques reposent généralement sur l’utilisation de la phosphatase alcaline (ALP) ou de la peroxydase de raifort (HRP), ou de leurs dérivés. Le système de liaison biotine-avidine (streptavidine) est souvent utilisé pour amplifier le signal colorimétrique de l’ALP ou de la HRP. Les tests fluorescents les plus courants utilisent l’isothiocyanate de fluorescéine (FITC), la rhodamine ou son dérivé, l’isothiocyanate de tétraméthylrhodamine (TRITC), la cyanine (Cy3) ou la phycoérythrine (R-PE).
Nous proposons des anticorps conjugués à divers marqueurs colorimétriques et fluorescents destinés à des applications de détection, de purification, de tri et de microscopie. Les anticorps conjugués sont produits chez divers animaux hôtes, ce qui les rend compatibles avec une large gamme de réactifs immunochimiques. Pour les utilisateurs dont les recherches nécessitent de marquer leurs propres réactifs, nous proposons des kits de marquage d’anticorps permettant la conjugaison de divers marqueurs (biotine, FITC, marqueurs CF™) à des anticorps monoclonaux et polyclonaux.
Protéines A, G et L
La protéine A est issue du Staphylococcus aureus. La protéine G est issue d’une espèce de Streptococcus. Toutes deux possèdent des sites de liaison pour la partie Fc des IgG mammifères. L’affinité de ces protéines pour les IgG varie selon l’espèce animale. La protéine G présente une affinité plus élevée pour les IgG de rat, de chèvre, de mouton et de bovin, ainsi que pour les IgG1 de souris et les IgG3 humaines. La protéine A présente une affinité plus élevée pour les IgG de chat et de cobaye (tableau 1). Outre les sites de liaison au Fc des IgG, la protéine G native contient des sites de liaison à l’albumine, à la région Fab des immunoglobulines et à la membrane, ce qui peut entraîner une coloration non spécifique. Ces problèmes ont été résolus par la création de formes recombinantes de la protéine. La protéine G recombinante a été modifiée pour éliminer la région de liaison à l’albumine, et la protéine G′ recombinante est une protéine tronquée dépourvue des sites de liaison à l’albumine, au Fab et à la membrane, tout en conservant le site de liaison au Fc, ce qui la rend plus spécifique pour les IgG que la forme native.
La protéine L, issue de Peptostreptococcus magnus, présente une affinité pour les chaînes légères kappa (tableau 2) de diverses espèces. Elle permet de détecter les IgG, IgA et IgM monoclonales ou polyclonales, ainsi que les fragments Fab, F(ab′)2 et les fragments Fv à chaîne unique recombinants (scFv) contenant des chaînes légères kappa. Elle se lie également aux IgG de poulet. Remarque : les espèces telles que les bovins, les chèvres, les moutons et les chevaux, dont les immunoglobulines contiennent presque exclusivement des chaînes lambda, ne se lieront pas bien, voire pas du tout, à la protéine L.
Réactifs de détection
Les protéines A et G sont utilisées comme réactifs généraux, non spécifiques à une espèce, pour la liaison des anticorps primaires ou des IgG de surface dans les tissus de mammifères. La protéine G est recommandée pour la plupart des espèces, y compris la souris et le rat. La protéine A est recommandée pour le chat et le cobaye. Aucune des deux n’est recommandée pour la détection des IgA ou des IgM, ni pour celle des fragments Fab, ni pour celle des IgG aviaires. Lorsqu’elles sont liées à une résine telle que l’agarose, la protéine A et la protéine G peuvent être utilisées pour purifier par affinité les immunoglobulines à partir du sérum ou du liquide d’ascite.
La protéine L est utilisée comme réactif général pour la liaison d’anticorps primaires de mammifères ou d’oiseaux, ou d’Ig de surface de toutes les classes. Elle est particulièrement utile pour la détection de fragments Fab, F(ab′)2 et de fragments scFv recombinants, pour la détection d’Ig liées à des récepteurs Fc, ou pour la détection d’anticorps monoclonaux en présence d’Ig bovines. Son utilisation est limitée à la détection d’Ig portant des chaînes légères kappa.
Résines
La protéine A et la protéine G possèdent des sites de liaison pour la partie Fc des IgG de mammifères. La capacité de ces protéines à se lier aux IgG varie selon les espèces. En général, les IgG présentent une affinité plus élevée pour la protéine G que pour la protéine A, et la protéine G peut se lier aux IgG provenant d’une plus grande variété d’espèces. L’affinité des différentes sous-classes d’IgG, en particulier celles de souris et d’origine humaine, pour la protéine A varie davantage que pour la protéine G. La protéine A peut donc être utilisée pour préparer des IgG isotypiquement pures à partir de certaines espèces. La protéine L convient à l’isolement d’anticorps monoclonaux de souris à partir de surnageants de cultures cellulaires sans contamination par des IgG bovines.
Cellules HeLa marquées avec un anticorps anti-tubuline de souris et un anticorps secondaire CF488A de chèvre anti-souris (microtubules, vert). Les filaments d'actine sont marqués avec de la phalloïdine CF640R (violet). Les noyaux sont contre-colorés au DAPI (bleu).
Anticorps marqués aux colorants CF™
Les colorants CF™ constituent une gamme de colorants fluorescents hautement hydrosolubles couvrant le spectre visible et le proche infrarouge (proche IR) destinés au marquage des anticorps. Développés par des scientifiques à l'aide de techniques chimiques innovantes, ces colorants CF™ offrent, grâce à leur conception rationnelle, une luminosité, une photostabilité et un choix de couleurs qui rivalisent avec la qualité des autres colorants disponibles dans le commerce.
Nous proposons des anticorps secondaires marqués aux colorants CF™, ayant fait l’objet de validations approfondies, dans une large gamme d’options spécifiques à chaque espèce.
Ressources connexes
- Article : Comment choisir un anticorps secondaire
Review the key factors that should figure in your decision to choose a secondary antibody. Learn about species, subclass, isotype, label, and more.
- Article : Conseils pour les protocoles d'immunofluorescence
Immunofluorescence uses antibody-conjugated fluorescent molecules for protein localization, modification confirmation, and protein complex visualization.
- Article : Utilisation d'anticorps conjugués et d'anticorps secondaires
Using conjugated antibodies and secondary antibodies in the lab.