フローサイトメトリーアプリケーション - バイオプロセス

多様なGuava easyCyteシステムによって、バイオプロセスに関する要望に応えることができるようになりました。Guava easyCyte 5HT HPLは、細胞生存率の簡便な測定や、正確な細胞計数に特に適しています。一方、Guava easyCyte 8HTは、より複雑な解析に適した追加機能を備えています。バイオプロセスに適した装置やアプリケーションの詳細については、下記のセクションをご覧ください。

細胞計数＆生存率アッセイ

• Guava easyCyte 5HT HPL装置とViaCount®キットは、細胞計数や生存率測定を実施するバイオプロセスの枠組みとして理想的な組み合わせです。
• Guava easyCyte 5HT HPLシステムは、細胞の絶対数の測定に加え、汎用的な蛍光色素を利用可能とする5種類のパラメータ（蛍光色3種類、散乱光2種類）や青色レーザーなど、需要の高い機能を備えています。96ウェルプレートオートサンプラートレイ内蔵で、複雑な生物学的研究（細胞フェノタイピング、シグナリング、サイトカイン産生、化合物スクリーニング）のために、より多くのデータを簡単に自動で得ることができます。
• Guava easyCyte 5HT HPLシステムはすべてのGuavaアッセイを行い、データ取得ならびに解析にはGuavaSoft®ソフトウェアを使用します。ViaCount®ソフトウェアモジュールは、21 CFR part 11に準拠しており、この手続き上の要件を目的とする機能を実施することができます。
• バイオプロセスに関する評価として、3種類の一般的なバイオプロセス細胞株を低濃度と高濃度の両条件において、Guava easyCyteでViaCount®を用いた場合の結果を、トリパンブルー染色法と比較しました。その結果、試験したすべての細胞株ならびに細胞濃度において、細胞数や生存率の評価が迅速で再現性が高いことが実証されました。

当社では、バイオプロセス開発やプロセスモニタリングのために、この手法のバリデーションを実施しています（Technical Brief TB2134EN00を参照してください）。

Guava easyCyte 5HT HPLを用いたViaCount® 手法とトリパンブルー染色の正確性の比較

Guava easyCyte HT HPLにおいて、3種類のバイオプロセス細胞株の生存率と細胞濃度をViaCount®を用いて試験しました。上記のとおり、結果は許容基準の範囲に良好に収まっており、試験したすべてのサンプルで予想細胞濃度と一致していました。

Guava easyCyte 5HT HPLを用いたViaCount®アッセイの正確性試験（トリパンブルー染色法と比較）

低濃度および高濃度の3種類のバイオプロセス細胞株について生存率および細胞濃度の結果のCV値を評価しました。Guava easyCyteの結果は、トリパンブルー染色法よりも、試験の許容基準によく一致していることが示されました。総細胞濃度と生存率に関し、Guava easyCyteでの高濃度と低濃度とのCV値の差異は、トリパンブルー染色法のCV値の差異よりも低くなっています。

このバイオプロセスアプリケーションで使用したGuava easyCyte 5HT HPLシステムの概要はこちらです：

• バイオプロセス解析用HPLオプションを備えたGuava easyCyte 5HT HPLシステム（カタログ番号：0500-4009）

ViaCount®アッセイは、2種類のDNA結合色素の細胞膜透過度の差異に基づき細胞を解析します。核酸染色色素は有核細胞のみを染色しますが、生死判定色素は死細胞を明るく染色します。核酸染色色素による陰性染色に基づき、残渣は結果から除外されます。