ChIPAb+ トリメチル-ヒストンH3（Lys9）-ChIP検証済み抗体およびプライマーセット

すべてのChIPAb+抗体は、ロットごとに毎回、クロマチン沈降について個別にバリデーションされています。各ChIPAb+抗体セットには、遺伝子座特異的な状況においてIP結果を生物学的に検証するため、コントロールプライマー（qPCRによりロットごとに検査）が含まれています。qPCRプロトコルとプライマー配列が提供されているため、研究者は、クロマチンについて抗体を使用する際にChIPプロトコルを検証できます。各セットには、ChIP反応の特異性を保証するため、 ネガティブコントロール抗体も含まれています。
ChIPAb+トリメチルヒストンH3（Lys9）セットには、トリメチルヒストンH3（Lys9）抗体、正常マウスIgG、およびChIPプライマー、ZNF554の117bp領域を増幅するコントロールプライマーが含まれています。トリメチルヒストンH3（Lys9）とネガティブコントロールは、拡張可能な「ChIPごと」の反応サイズで提供され、トリメチルヒストンH3（Lys9）結合クロマチンの沈殿を機能的に検証するために使用できます。

ヒストンH3は、真核細胞のクロマチン構造に関わる5種類の主要なヒストンタンパク質の1つです。H3は、中心的な球状ドメインと長いN末端尾部を特徴とし、「ひも構造に付着したビーズ状」のヌクレオソーム構造に関わっています。ヒストンタンパク質は、高度に翻訳後修飾を受けますが、5種類のヒストンのうちヒストンH3が最も広範に修飾されます。ヒストンH3の配列バリアントとさまざまな修飾状態は、遺伝子の動的かつ長期的な調節に役割を果たすと考えられています。ヒストンH3のLys9のトリメチル化（H3K9me3）は、最もよく研究されているエピジェネティックマーカーの1つです。H3K9me3は、おそらくSwi6やHP1αなどのクロマチン関連タンパク質の結合のための認識モチーフとして作用することによって、ユークロマチン遺伝子の抑制とヘテロクロマチン構築のエピジェネティックな制御において機能します。H3K9のトリメチル化を担う酵素はSUV39H1とSUV39H2です。

約17 kDa

Lys9がトリメチル化されたヒトヒストンH3に相当するKLHコンジュゲート合成ペプチド。

エピトープ：トリメチルLys9

このChIPAb+ トリメチル-ヒストンH3（Lys9）-ChIP検証済み抗体／プライマーセットには、便宜のため抗体、特異的なコントロールPCRプライマーが含まれています。

クロマチン免疫沈降：
代表的なロットのデータ。
HeLa細胞（IPあたり1 X 10E6細胞相当）から調製した超音波処理クロマチンを、1 µLの正常マウスIgGまたは1 µLの抗トリメチルヒストンH3（Lys9）、およびMagna ChIP^® Gキット（カタログ番号： 17-611）を用いたクロマチン免疫沈降に使用しました。 ポジティブ遺伝子座としてのヒトZNF554領域に特異的なChIPプライマーおよびネガティブ遺伝子座としてのヒトGAPDHプライマーを用いたqPCRで、トリメチルヒストンH3（Lys9）に結合したDNAフラグメントの免疫沈降の成功が確認されました。 （図2）。 データは、各アンプリコンおよびChIPサンプルについて、使用したクロマチンに対する各IPサンプルの使用割合として示します。
実験の詳細は、EZ-Magna ChIP G（カタログ番号： 17-409）またはEZ-ChIP（カタログ番号：17-371）プロトコルを参照してください。
ウェスタンブロッティング：
代表的なロットのデータ。
リコンビナントヒストンH3（カタログ番号：14-494）（レーン1）およびHeLa酸抽出物（レーン2）を、電気泳動で分離し、PVDFメンブレンに転写し、抗トリメチルヒストンH3（Lys9）、クローンCMA308(2 μg/mL）で標識しました。
HRPをコンジュゲートしたヤギ抗マウス二次抗体と化学発光検出システムを用いてタンパク質を可視化しました。
矢印は、トリメチルヒストンH3（Lys9）（約17 kDa）を示します。（図3）。

研究カテゴリー
エピジェネティクス・核内機能分子

研究サブカテゴリー
ヒストン

この抗体は、Lys9でトリメチル化されたヒストンH3を認識します。高濃度ではジメチルLys9との交差反応性がいくらか認められていますが、特異性の差は>27倍です1。Ser10のリン酸化は、トリメチルLys91への抗体の結合を妨げます。

配列相同性に基づき、幅広い種での交差反応性が予想されています。

1セット当たり25アッセイ。推奨用途：クロマチン免疫沈降あたり約1 μLの抗体（生物学的な状況による）。

フォーマット：精製

プロテインG精製

抗トリメチル-ヒストンH3（Lys9）（マウスモノクローナル）。グリセロールを30%まで添加する前の、0.05%アジ化ナトリウムを含むPBS中の25 µLの精製マウスモノクローナルIgG1を1バイアル。-20°Cで保存してください。
正常マウスIgG。0.1%アジ化ナトリウムを含む 25 µLの保存バッファー中の25 µgの精製IgGを1バイアル。 -20°Cで保存してください。
コントロールプライマー、ZNF554。それぞれ5 μMのヒトZNF554の3’末端に特異的なプライマー75 μLを1バイアル。-20°Cで保存してください。
フォワード：CGG GGA AAA GCC CTA TAA AT
リバース：TCC ACA TTC ACT GCA TTC GT

2～8°Cで受領日から1年間安定です。製品の回収率を最大化するため、キャップを開ける前に、バイアルを遠心してください。凍結融解を繰り返さないでください。IgGが損傷され、製品性能に影響を与える可能性があります

クロマチン免疫沈降：
代表的なロットのデータ。
HeLa細胞（IPあたり1 X 10E6細胞相当）から調製した超音波処理クロマチンを、1 µLの正常マウスIgGまたは1 µLの抗トリメチルヒストンH3（Lys9）、およびMagna ChIP^® Gキット（カタログ番号： 17-611）を用いたクロマチン免疫沈降に使用しました。 ポジティブ遺伝子座としてのヒトZNF554領域に特異的なChIPプライマーを用いたqPCRで、トリメチルヒストンH3（Lys9）に結合したDNAフラグメントの免疫沈降の成功が確認されました（図1）。 実験の詳細は、EZ-Magna ChIP G（カタログ番号： 17-409）またはEZ-ChIP（カタログ番号：17-371）プロトコルを参照してください。

コントロール
正常マウスIgG、およびヒトZNF554に特異的なプライマーを含みます。

MAGNA CHIP is a registered trademark of Merck KGaA, Darmstadt, Germany

UPSTATE is a registered trademark of Merck KGaA, Darmstadt, Germany

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