ChemiScreen 膜製剤
組換えヒト EP4 プロスタノイド受容体

ヒト EP4

プロスタノイドは、シクロオキシゲナーゼの作用によって産生され、異性化酵素や合成によってさらに修飾された一連のアラキドン酸代謝産物です。 細胞は合成後速やかにプロスタノイドを分泌し、プロスタノイドは 8 種類の GPCR ファミリーに結合して生物学的作用を発揮します（Narumiya and FitzGerald, 2001）。 プロスタグランジン PGE2 は、疼痛、血管拡張、T細胞の免疫抑制、骨リモデリング、発癌促進を引き起こします。 4 つの関連 GPCRである EP1、EP2、EP3 および EP4は、それぞれ PGE2 と結合しますが、各受容体の G タンパク質の結合状態が異なるため、生物学的作用が異なります。 EP4 は主に G と結合し、細胞内の cAMP レベルを上昇させます。 新生児の発育過程において、EP4 は動脈管の閉鎖に関与しており、これは胎盤から肺への循環の切り替えに必要なプロセスです（Nguyen et al., 1997）。 また、EP4 は骨芽細胞形成を促進することで、PGE2 誘導性の骨形成を仲介しており、選択的 EP4 アゴニストは骨粗鬆症の潜在的治療薬として評価されています（Yoshida et al., 2002）。 Chemicon′の EP4 膜製剤は、当社独自の安定性組換え細胞株から作成された粗製膜製剤です。GPCR の表面発現が高レベルであるため、EP4 とプロスタグランジン E2 との相互作用に対するアンタゴニストをスクリーニングするのに理想的な HTS ツールです。 この膜製剤は [³H]-プロスタグランジン E2 に対して 1.27-1.85 nM の Kd を示します。 5 µg/ウェル EP4 膜製剤と 1.5 nM [³H]-プロスタグランジン E2で、3 倍以上のシグナル／バックグラウンド比が得られました。

放射性リガンド結合アッセイおよびGTPγS結合。

GPCR クラス：A

タンパク質標的：EP4

標的サブファミリー：プロスタノイド

インキュベーション条件
非結合 96-ウェルプレート内で、膜を放射性リガンドおよび非標識競合物質（試験濃度については図 1 および 2 を参照）と結合緩衝液中で混合し、1～2時間インキュベートします。ろ過の前に、GF/C 96 ウェルフィルタープレートを 0.33% ポリエチレンイミンで 30 分コーティングし、50mM HEPES、pH7.4、0.5% BSA で洗浄します。 結合反応をフィルタープレートに移し、洗浄緩衝液で 3 回洗浄します（1 回の洗浄につき各ウェル 1 mL）。 プレートを乾燥させ、カウントします。

結合緩衝液：50 mM HEPES、pH 7.4、5 mM MgCl₂、1 mM CaCl₂、0.2% BSA、ろ過後、4°C で保存。
放射性リガンド：[³H]-プロスタグランジン E2（Perkin Elmer #NET428）
洗浄緩衝液：50 mM HEPES、pH 7.4、500mM NaCl、0.1% BSA、ろ過後、4°Cで保存。.

各パッケージには、少なくとも 200 アッセイ（ユニット）分の膜が収められています。1 ユニットとは、1.5 nM の3H 標識 プロスタグランジン E2 で 3 倍以上のシグナル：バックグラウンドが得られる膜の量を意味します。

パッケージ緩衝液中の液体：50 mM トリス、pH7.4、10% グリセロール、1% BSA、保存料無添加。
包装方法：膜タンパク質は包装緩衝液中で指示濃度に調整し、急速凍結して -80°C で保存したものです。

凍結したまま、-70°C で最長 2 年保存できます。 凍結融解しないでください。

仕様：
さまざまな量の EP4 膜製剤を用いた競合結合アッセイで得られたシグナル：バックグラウンドおよび特異的結合値：

	10 µg/ウェル
シグナル：バックグラウンド	3.9
特異的結合（cpm）	643

1 ユニット = 10 µg 膜製剤　
Bmax：16.1 pmol/mg
Kd： 1.57 nM

CHEMICON is a registered trademark of Merck KGaA, Darmstadt, Germany

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