ChIPAb+ JHDM1B抗体

JHDM1B（十文字ドメイン含有ヒストン脱メチルタンパク質1B）およびKDM2B。Fボックスモチーフが存在することから、このタンパク質はFボックス／LRRリピートタンパク質10（FBXL10）としても知られています。このタンパク質はヒストンH3のリシン36に対するヒストン脱メチル化酵素として作用し、モノおよびトリ-メチル化H3リシン36に対しては活性が弱いかまたは全くないジメチル化リシン3を優先的に脱メチル化します。

すべてのChIPAb+抗体は、ロットごとに毎回、クロマチン沈降について個別に検証されています。各ChIPAb+抗体セットには対照プライマー（ロットごとにqPCRで検査）が含まれており、遺伝子座特異的な状況においてIPの結果を生物学的に検証することができます。qPCRプロトコルとプライマー配列が提供されているため、クロマチンに対して抗体を使用する際にChIPプロトコルを検証することができます。各セットには、ChIP反応の特異性を保証するための陰性対照抗体も含まれます。
ChIPAb+JHDM1Bセットには、JHDM1B抗体、正常ウサギIgG、ChIPプライマーであるヒトβ-グロビンの110 bp領域を増幅する対照プライマーが含まれます。JHDM1Bおよび陰性対照は、スケーラブルな「ChIP反応1回ごとの」サイズで提供され、JHDM1B関連クロマチンの沈降を機能的に検証するために使用できます。

実測値：約165 kDa。一部のライセートでは、特性が明らかになっていない低分子量のバンドが認められることがあります。

ヒトJHDM1Bに対応するKLH結合直鎖ペプチド。

このChIPAb+JHDM1B-ChIP検証済み抗体およびプライマーセットは、抗体と特異的対照PCRプライマーが含まれていて便利です。

クロマチン免疫沈降：
代表的ロットのデータ。
HeLa細胞（細胞1×10E6個相当量/IP）から調製した超音波処理クロマチンに対し、正常ウサギIgGまたは抗JHDM1B抗体2 µLおよびMagna ChIP Aキット（カタログ番号：17-610）を用いてクロマチン免疫沈降を行いました。 ChIPプライマー、陽性遺伝子座としてヒトβ-グロビン、陰性遺伝子座としてβ-アクチンプロモータープライマーを用いたqPCRにより、JHDM1B関連DNA断片の免疫沈降の成否を検証しました （図2）。 データは、各アンプリコンおよびChIPサンプルについて、添加したクロマチンに対する各IPサンプルの添加率として示しています。
実験の詳細は、EZ-Magna ChIP A（カタログ番号：17-408）またはEZ-ChIP（カタログ番号：17-371）のプロトコルを参照してください。
ウェスタンブロッティング：
代表的ロットのデータ。
HeLa核抽出物を抗JHDM1B抗体（1 µg/mL）で検出しました。 HRP標識したロバ抗ウサギIgG二次抗体と化学発光検出システムを用いてタンパク質を可視化しました。
矢印はJHDM1B（約165 kDa）を示します（図3）。 一部のライセートでは、109 kDa付近に特性が明らかになっていないバンドが認められることがあります。
免疫細胞染色：
代表的ロットのデータ。
抗JHDM1B（赤色）を用いたNIH/3T3細胞とHeLa細胞の共焦点蛍光解析。アクチンフィラメントはAlexa Fluor488色素 -ファロイジン（緑色）で標識されています。核はDAPI（青色）で染色します。この抗体は核を積極的に染色します（図4）。

研究のカテゴリ
エピジェネティクスおよび核機能

研究のサブカテゴリ
ヒストン

1セットあたりアッセイ25回分。推奨される使用方法：クロマチン免疫沈降1回あたり抗体1.4 μg（2 μL）（生物学的条件による）。

アフィニティー精製

成分：
抗JHDM1B（ウサギポリクローナル）抗体。 グリセロールを30%になるように添加する前に、150 mM NaClと0.05%アジ化ナトリウムを含有する0.1 Mトリス-グリシン緩衝液（pH7.4）に溶解した精製ウサギポリクローナル抗体50 µLを含むバイアル1本。-20℃で保存します。
濃度：0.7 mg/mL
正常ウサギIgG。0.05%アジ化ナトリウムを含有する125 µLの保存緩衝液中にウサギIgG 125 µgを含むバイアル1本。 -20℃で保存します。
ChIPプライマー、ヒトβ-グロビン。ヒトβ-グロビンプロモーターに特異的な各プライマー75 μL（5 μM）を含むバイアル1本。-20℃で保存します。
FOR：AGG ACA GGT ACG GCT GTC ATC
REV：TTT ATG CCC AGC CCT GGC TC

-20℃で受領日から1年間安定です。溶解する前に、バイアルを短時間微量遠心して、バイアルの底に材料を沈降させてください。初回溶解後キャップを取り外す前に、バイアルを遠心して、溶液を穏やかに混合してください。微量遠心管に分注し、 -20℃で保存します。IgGを損傷し、製品の性能に影響を及ぼす可能性のある凍結／融解の繰り返しは避けてください。
注：冷凍庫の温度が -20℃未満に変動すると、グリセロール含有溶液が保存中に凍結する可能性があります。

クロマチン免疫沈降：
代表的ロットのデータ。
HeLa細胞（細胞1×10E6個相当量/IP）から調製した超音波処理クロマチンに対し、正常ウサギIgGまたは抗JHDM1B抗体2 µLおよびMagna ChIP^® Aキット（カタログ番号：17-610）を用いてクロマチン免疫沈降を行いました。 ChIPプライマーであるヒトβ-グロビンを用いたqPCRによって、JHDM1B関連DNA断片の免疫沈降の成否を検証しました（図1）。
実験の詳細は、EZ-Magna ChIP A（カタログ番号：17-408）またはEZ-ChIP（カタログ番号：17-371）のプロトコルを参照してください。

対照
正常ウサギIgGおよびヒトβ-グロビンに特異的なプライマーがあります。

濃度：ロットの具体的な濃度につきましては分析証明書をご参照ください。

MAGNA CHIP is a registered trademark of Merck KGaA, Darmstadt, Germany

UPSTATE is a registered trademark of Merck KGaA, Darmstadt, Germany

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