抗リン酸化グルココルチコイド受容体抗体（Ser287）

Glucocorticoid receptor（UniProt：P06536、別名：GR、Nuclear receptor subfamily 3 group C member 1）は、ラットにおいてNr3c2（別名：Grl、Grc）遺伝子（Gene ID：24413）によってコードされています。2つの作用機序を持っており、核DNAとミトコンドリアDNAの両方についてグルココルチコイド応答エレメントに結合する転写因子として機能し、またその他の転写因子の修飾因子としても機能します。GRは、複数の保存構造要素で構成されており、それにはC末端リガンド結合ドメイン（受容体二量体化とホルモン依存的遺伝子トランス活性化にとって非常に重要な残基を有する）、核移行シグナルのある隣接したヒンジ領域、DNA結合ドメインのある中央のジンクフィンガー、リガンド非依存的遺伝子転写に関与しているアミノ末端可変領域などがあります。ホルモンの不在下では、かなりの数のGRが、調節シャペロンタンパク質（HSP90、HSP70、FKBP52）との会合を介して不活性型で細胞質に局在しています。ホルモン結合の際、GRは、シャペロン複合体から放出され、二量体として核へと移動してグルココルチコイド応答エレメント（GRE）と会合し、それによって特定の標的遺伝子の転写を増強または抑制します。GRが介在する転写活性化は、リン酸化により調節され、受容体アゴニストへの結合時、過剰リン酸化されます。Ser155とSer287におけるGRの基底リン酸化は低いですが、BDNF処理により高度に誘導されます。BDNF誘導リン酸化は、BDNF強化遺伝子のプロモーターにおいてGR占有率を高め、補助因子動員を増やすことが報告されています。

実測値：約90 kDa。算出値：85.66/81.51/85.82/81.67/64.75/60.60/82.85/78.70/82.90 kDa（ヒトアイソフォームα-A/β-A/α-2; γ/β-2/GR-A α/GR-A β/α-B/β-B/hGRΔ313-338）、86.05/86.21/83.27/83.43 kDa（マウスアイソフォーム1-A/2-A/1-B/2-B）、および87.56/84.83 kDa(ラットアイソフォームA/B）。一部のライセートでは、特性が明らかになっていないバンドが認められることがあります。

リン酸化セリン残基を有するラットグルココルチコイド受容体標的部位配列に相当する合成ペプチド。

このウサギポリクローナル抗GR pSer287（カタログ番号ABS1582）を用いた、セリン287でリン酸化されたグルココルチコイド受容体の検出は、ウェスタンブロッティングと免疫蛍光染色、ウェスタンブロッティング、ウェスタンブロッティングとクロマチン免疫沈降（ChIP）での使用が検証されています。

ウェスタンブロッティング：4.2 µg/mLで使用、野生型の初代耳線維芽細胞において100 nM dexamethasone /100 nM H2O2処理により誘導されたグルココルチコイド受容体Ser287リン酸化を検出できますが、GR S287Aノックインマウスでは検出できません（Elina SheresthaとMichael J. Garabedian、PhDのご厚意による提供）。

クロマチン免疫組織染色（ChIP）：野生型ラットGRを安定発現する293TrkB細胞のデキサメタゾン処理またはBDNF/dexamethasone 同時処理においてSGK1とGILZの調節領域へ動員されたGRのSer287リン酸化の増強を検出できます（Lambert, W.M., et al. (2013)。Mol. Cell. Biol. 33(18):3700-3714).

免疫蛍光染色：4％ paraformaldehydeで固定した自由浮遊マウス冠状切片の蛍光免疫組織染色により、視床下部CRH産生神経におけるGR S287リン酸化を検出できます。GR S287リン酸化は、BDNF+/とTrkB TrkB+/のマウス由来の脳組織において低下し、誘導BDNF過剰発現において増加し、loxPが導入されたGRアレルを持つ遺伝子導入マウスにおいてCre依存的切除の際に低下しました（Lambert, W.M., et al. (2013)。Mol. Cell. Biol. 33(18):3700-3714）。

ウェスタンブロッティング：初代ラット皮質ニューロン、TrkB発現PC12細胞、野生型ラットGRを安定発現している293TrkBにおいて、BDNF誘発性GR Ser287リン酸化を検出でき、デキサメタゾン注射後または強制水泳によるストレス誘発性内在グルココルチコイド増加後のマウス脳におけるGR Ser287リン酸化の上方制御を検出できます（Lambert, W.M., et al. (2013)。Mol. Cell. Biol. 33(18):3700-3714）。

このポリクローナル抗体は、BDNF+/ and TrkB TrkB+/マウス脳組織においてGR S287リン酸化の低下を検出し、loxPが導入されたGRアレルを持つ遺伝子導入マウスにおいて誘導性BDNFの過剰発現時のGR pS287の上方制御およびCre依存性GR pS287の下方制御を検出しました（Lambert, W.M., et al. (2013)。Mol. Cell. Biol. 33(18):3700-3714）。標的リン酸化部位は、UniProt（P06536）により報告されたラットGRスプライスアイソフォームAのSer287およびアイソフォームBのSer260に相当します。相当する部位は、UniProt（P04150 & P06537）により報告されたヒト（Ser247 アイソフォームα-B & Beta-BのSer247、およびGR-P以外の7つすべてのスプライスアイソフォームのSer267）およびマウス（アイソフォーム1-A & 1-BのSer275、アイソフォーム2-A & 2-BのSer248）のGR配列でも確認されています。

精製ウサギポリクローナル抗体、TBS含有バッファー（pH8.0）（保存剤無添加）に溶解。

マウス耳線維芽細胞においてウェスタンブロッティングにより評価済み。

ウェスタンブロッティング：2.1 µg/mLで使用、野生型の初代耳線維芽細胞において100 nM dexamethasone/100 nM H2O2処理により誘導されたグルココルチコイド受容体Ser287リン酸化を検出できますが、GR S287Aノックインマウスでは検出できません。

濃度：ロットに固有のデータシートを参照してください。