Anti-BiP (GRP78) Antibody, arginylated (Nt-Glu19)

78 kDaのグルコース制御タンパク質（UniProt P11021）（別名：BiP、Endoplasmic reticulum lumenal Ca(2+)-binding protein grp78、GRP-78、Heat shock 70 kDa protein 5、Immunoglobulin heavy chain-binding protein）は、ヒトHSPA5（別名：GRP78）遺伝子（Gene ID 3309）によってコードされています。BiP（GRP78またはheat shock 70 kDa protein 5）、calreticulin（CRT）、およびprotein disulphide isomerase（PDI）は、小胞体内腔フォールディング因子であり、他のPTM酵素と共に、新たに合成されたタンパク質がERから放出される前のプロセスをサポートします。BiP、CRT、およびPDIそれ自体は、その合成後には翻訳後シグナルペプチドが除去され、新たに形成されたN末端のそれぞれE19、E18、およびD18が露出します。成熟タンパク質のN-末端のD残基とE残基は、arginine-tRNA-protein transferase 1/ATE1が媒介するアルギニル化を許容し、非ER機能に関与できるように細胞局在が変化したアルギニル化された成熟タンパク質（R-BiP, R-CRT, R-PDI）を形成します。一般に、刺激を受けていない細胞で検出できるのはR-CRTとR-PDI（R-BiP非該当）の基礎レベルに限られますが、細胞質dsDNAへの曝露とプロテアソーム阻害はこれら3種類すべてのタンパク質のN-末端アルギル化レベルを向上させました。これは、細菌の侵襲に対抗する先天性免疫応答が役割を共有していることを意味します。さらに、thapsigargin処理によるERストレス誘導は、プロテアソーム阻害により誘発されるR-BiP、R-CRT、およびR-PDIの細胞レベルの上方制御を相乗的に促進させるため、ERストレスが、N末端アルギニル化のための小胞体内腔のBiP、CRT、DPIの供給を加速させることが示唆されます。

約72 kDa、実測。算出値：70.62/70.63/70.62/70.63 kDa（ウシ／ヒト／マウス／ラット）。一部のライセートでは、特性が明らかになっていないバンドが認められることがあります。

アルギニル化された成熟ヒトBiP (GRP78)のN末端配列に相当する直鎖ペプチド。

エピトープ：N末端

Western Blotting Analysis: 0.5 µg/mL from a representative lot detected Arg-BiP(19-651), but not Val-BiP(19-651) GFP fusion in 7.5 µg of lysate from MEF cells transfected to express either Ub-Arg-BiP(19-124) or Ub-Val-BiP(19-124) GFP fusion contruct co-translationally cleaved into Ub and Arg-BiP(19-124)-GFP or Val-BiP(19-124)-GFP by intracellular Ub hydrolases.

Immunocytochemistry Analysis: 10 µg/mL from a representative lot detected BiP Nt-Glu19 arginylation induction in (18-hr 3 µM MG132 and 200 nM thapsigargin) treated HeLa cells (Courtesy of Yong Tae Kwon, Ph.D. , Seoul National University, Korea).

Immunocytochemistry Analysis: 10 µg/mL from a representative lot detected BiP Nt-Glu19 arginylation induction in (18-hr 3 µM MG132 and 200 nM thapsigargin) treated wild-type, but not arginine-tRNA-protein transferase 1/ATE1-deficient, MEFs (Courtesy of Yong Tae Kwon, Ph.D. , Seoul National University, Korea).

Western Blotting Analysis: 0.2 µg/mL from a representative lot detected BiP Nt-Glu19 arginylation induction in (18-hr 3 µM MG132 and 200 nM thapsigargin) treated HeLa cells (Courtesy of Yong Tae Kwon, Ph.D. , Seoul National University, Korea).

Western Blotting Analysis: 0.2 µg/mL from a representative lot detected a target R-BiP(19-651)-GFP fusion band in MEF cells transfected to express Ub-R-BiP(19-651)-GFP or Ub-BiP(19-651)-GFP, but not Ub-V-BiP(19-651)-GFP. In ATE1-deficient MEFs, the target R-BiP(19-651)-GFP band was detected only when the cells were tranfected to express Ub-R-BiP(19-651)-GFP, but not Ub-BiP(19-651)-GFP (Courtesy of Yong Tae Kwon, Ph.D. , Seoul National University, Korea).

Dot Blot Analysis: A representative lot detected the immunogen peptide, but not the control peptide without arginylation at the N-terminal Glu19 (Cha-Molstad, H., et al. (2015). Nat. Cell Biol. 17(7):917-929).

ELISA Analysis: A representative lot detected the immunogen peptide, but not the control peptide without arginylation at the N-terminal Glu19 (Cha-Molstad, H., et al. (2015). Nat. Cell Biol. 17(7):917-929).

Immunocytochemistry Analysis: A representative lot detected poly(dA:dT) transfection-induced formation of BiP arginylation/R-BiP-positive puncta co-localized with those containing p62, LC3, and ubiquitin conjugates, while R-BiP and ER stainings are mutually exclusive (Cha-Molstad, H., et al. (2015). Nat. Cell Biol. 17(7):917-929).

Western Blotting Analysis: A representative lot detected the production of R-BiP(19-651)-Tag fusions from exogenously expressed Ub-BiP(19-N)-Tag and Ub-R-BiP(19-N)-Tag, but not Ub-V-BiP(20-N)-Tag, constructs. In ATE1-deficient cells, the target R-BiP(19-651)-GFP band was detected only when the cells were tranfected to express Ub-R-BiP(19-651)-GFP, but not Ub-BiP(19-651)-GF (Cha-Molstad, H., et al. (2015). Nat. Cell Biol. 17(7):917-929).

Western Blotting Analysis: A representative lot detected BiP (GRP78) Nt-Glu19 arginylation induction upon arginine-tRNA-protein transferase 1 (ATE1) 1A7A isoform overexpression or transfection of various dsDNAs, including poly(dA:dT), in HeLa cells. Combined proteasome inhibition and ER stress induction by an 18-hr 10 µM MG132 and 100 nM thapsigargin treatment synergized the two drugs′ efficacy toward cellular Calreticulin Nt-Glu18 arginylation induction (Cha-Molstad, H., et al. (2015). Nat. Cell Biol. 17(7):917-929).

このウサギポリクローナル抗BiP（GRP78）、アルギニル化（Nt-Glu19）（カタログ番号ABS2103）を用いた成熟Bip（GRP78）の検出は、ドットブロット、ELISA、免疫細胞染色、ウェスタンブロッティングでの使用が検証されています。

研究のカテゴリ
シグナル伝達

このウサギポリクローナル抗体は、免疫原ペプチドを特異的に検出しますが、N末端Glu19でアルギニル化されていないコントロールペプチドは検出しません（Cha-Molstad, H., et al. (2015).Nat. Cell Biol. 17（7）:917-929）。

PBSおよび0.05%アジ化ナトリウムを含むバッファー中の精製ウサギポリクローナル抗体

アフィニティー精製。

2～8°Cで受領日から1年間安定です。

HEK293細胞ライセートのウェスタンブロットで評価されています。

ウェスタンブロッティング：1 µg/mLで使用、3 µM MG132および200 nM thapsigarginで17時間処理したHEK293細胞からのライセート7.5 µgにおいて、BiP（GRP78）Nt-Glu19アルギニル化誘導を検出できます。

濃度：ロットに固有のデータシートを参照してください。

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