ChemiScreen 膜製剤 組換えヒト D₂ ドーパミン受容体

ドーパミンはカテコ-ルアミン系の神経伝達物質で、中枢神経系では運動、認知、情動、神経内分泌のプロセスを制御し、末梢神経系では心臓血管、腎臓、消化管のプロセスを調節します。 ドーパミンの生物学的活性は、5 種類の GPCR ファミリーによって媒介されます。 D₁ および D₅ サブタイプは G_s に結合して細胞内cAMPを増加させ、D₂、D₃ および D₄ サブタイプは G_i に結合して cAMP を減少させます（Missale et al., 1998）。D₂ ドーパミン受容体は、プロラクチン分泌の調節や抗精神病薬に対する親和性から、臨床的に特に注目されています。 D₂ 受容体は、選択的にスプライシングされた 2 種類のアイソフォーム（D_2S および D_2L）として存在し、その違いは、3 番目の細胞内ループに挿入された 29 アミノ酸の長さにあります（Giros et al., 1989; Grandy et al., 1989）。Millipore′の D₂ ドーパミン膜製剤は、当社独自の安定性組換え細胞株から作成された粗製膜製剤です。GPCR の表面発現が高レベルであるため、D₂ ドーパミン受容体とそのリガンドとの相互作用のアンタゴニストをスクリーニングするのに理想的な HTS ツールです。 この膜製剤は [¹²⁵H]-ヨードスピペロンに対して 0.51 nM の Kd を示します。 5.0 ug/ウェル D2 ドーパミン膜製剤と 0.1 nM [¹²⁵I]-ヨードスピペロンで、10 倍以上のシグナル／バックグラウンド比が得られました。

ヒトドーパミン受容体 2

放射性リガンド結合アッセイおよびGTPγS結合

GPCR クラス：A

タンパク質標的：D2L

標的サブファミリー：ドパミン

インキュベーション条件
非結合 96-ウェルプレート内で、膜を放射性リガンドおよび非標識競合物質（試験濃度については図 1 および 2 を参照）と結合緩衝液中で混合し、1～2時間インキュベートします。ろ過の前に、FC 96 ウェル採取プレート（Millipore カタログ番号 MAHF C1H）を 0.33% ポリエチレンイミンで 30 分コーティングし、50 mM トリス、pH 7.4 で洗浄します。 結合反応をフィルタープレートに移し、洗浄緩衝液で 3 回洗浄します（1 回の洗浄につき各ウェル 1 mL）。 プレートを乾燥させ、カウントします。

結合緩衝液：50 mM トリス、pH 7.4、120 mM MgCl、ろ過後、4°C で保存
放射性リガンド：[¹²⁵I]-ヨードスピペロン（Perkin Elmer # NEX284）
洗浄緩衝液：50 mM トリス、pH 7.4、ろ過後、4°Cで保存。.

各パッケージには、少なくとも 200 アッセイ（ユニット）分の膜が収められています。1 ユニットとは、0.1 nM の[¹²⁵I]-標識ヨードスピペロンで 10 倍以上のシグナル：バックグラウンドが得られる膜の量を意味します。

パッケージ緩衝液中の液体：50 mM トリス、pH7.4、10% グリセロール、1% BSA、保存料無添加。
包装方法：膜タンパク質は包装緩衝液中で指示濃度に調整し、急速凍結して -80℃ で保存したものです。

凍結したまま、-70°C で最長 2 年保存できます。 凍結融解しないでください。

表1. さまざまな量の ドーパミン 受容体膜製剤を用いた競合結合アッセイで得られたシグナル：バックグラウンドおよび特異的結合値。

	10 µg/ウェル	5 µg/ウェル
シグナル：バックグラウンド	23.6	27.5
特異的結合（cpm）	8331	9927.2

仕様：1 ユニット = 5.0 µg 膜製剤
Bmax：6.03 pmol/mg
K_d： 0.51 nM

CHEMICON is a registered trademark of Merck KGaA, Darmstadt, Germany

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