白血病抑制因子タンパク質、組換えラット

ラット LIF（rtLIF）は 202 アミノ酸残基を含む 22.1kDa のタンパク質で、マウス LIF とはアミノ酸配列で 91％ の同一性を示します（Takahama etal 1998）。ラット LIF とマウス LIF の二次構造分析から、両タンパク質の二次元構造に違いがあることが示されました。 ラットES細胞の未分化表現型の維持において、rtLIFが同程度の濃度のマウスLIFよりも有効であることが、複数の研究によって示されています（Takahama, et al 1998）。

白血病抑制因子（LIF）は、自然発生的な分化を抑制することによって胚性幹細胞の長期的な維持を促進するリンパ系因子です。LIFには他にも、コリン作動性ニューロンの分化、幹細胞の多能性の制御、骨および脂肪の代謝、特定因子依存性の細胞株の有糸分裂誘発、in vivoでの巨核球の産生促進など、多くの作用があります。

製品の由来：rtLIFはpGEX発現系を用いてGSTとの融合タンパク質としてE. coliで発現されています。GST部分からトロンビンで切断し、イオン交換クロマトグラフィーで精製しています。

推奨プロトコル

M1 バイオアッセイ

1. M1 バイオアッセイは、1 mL の DME（20% FCS、0.3% 寒天培地）中約 100 個の細胞を含む in vitro 半固形寒天培地を用いて実施します。

2. 100 μL のサンプルまたは rtLIF（5% FCS 生理食塩水溶液中 10［e4］ユニット/mL）を、2 倍段階希釈して 35 mm ペトリ皿に加えます。2 回反復して行います。

3. 100 μL の 5% FCS 生理食塩水溶液を 2 枚のコントロールスライドに加えます。

4. 37° で 10% CO2 の完全加湿空気中で 7 日間インキュベートします。

5. 分化が認められたコロニーの数をスコア化します（注記：50ユニットは、コロニーの50%が分化する活性量と定義されます）。

詳細は www.esgro-lif.com をご覧ください

50 mM リン酸ナトリウム/1mM DTT/10% グリセロール/250 mM NaCl、pH 7.4、0.02% Tween 20で液体。 保存剤は添加されていません。

ラット LIF はドライアイス上で輸送されます。 有効期限まで -20°C で保存してください。さらに希釈する場合は、タンパク質（1% BSAなど）または Tween 20 を添加したバッファーまたは培地希釈し、-20°C で保存してください 凍結融解の繰り返しは避けてください。

比活性：ラット LIF の活性は、M1 骨髄性白血病細胞の分化を誘導する能力によって決定されます。このアッセイにおけるラット LIFの検出可能な最低濃度は 0.5 ng/mL です。

無菌試験およびマイコプラズマ試験で陰性であることが確認されています。

比活性：50 単位は、1 mL の寒天培地で M1 コロニーの 50% に分化を誘導するために必要なラット LIF の量と定義されています。

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