抗BrdU抗体 クローンAH4H7-1／131-14871

ブロモデオキシウリジン（BrdU）はチミジンアナログであり、DNA合成中にDNAに特異的に結合します。抗ブロモデオキシウリジンモノクローナル抗体を用いて、BrdUが取込まれた細胞を特定できます。 この免疫学的検出法には、複製中の細胞を特定するための放射性チミジン取り込み法と比較して、いくつかの利点があります。トリチウム標識細胞のオートラジオグラフィーに必要となる数日間の待機を行わずに、標識と検出を同日に実施可能であり、最適な曝露時間を得るために複数の検体を使用する必要がなくなります。さらに、フローサイトメトリー分析による抗ブロモデオキシウリジン染色により、複数のパラメータを同時に評価することができます。 抗ブロモデオキシウリジンモノクローナル抗体は、血中（Campana et al., 1988）、組織中（Schutte et al., 1987; Hayashi, et al., 1988）、腫瘍中（Hoshino et al., 1986; Morstyn et al., 1983）の増殖細胞を特定するために用いられるほか、形質細胞の標識指数を決定するためにも用いられています（Greipp et al., 1985）。

検出されるブロモデオキシウリジン取込みタンパク質の分子量に依存します。

ブロモデオキシウリジン-ウシ血清アルブミン濃縮液

Immunohistochemistry: (6 μg/ml)

Flow Cytometry: (0.2 μg/100 μl/10E6 cells) Optimal working dilutions must be determined by end user.

APPLICATIONS

Flow cytometry:The method below is based on that of M. Vanderlaan et al. (1986). Variations of this method exist in the literature, one consideration being the effect various fixation procedures have on the light-scattering properties of different cell populations. Procedure:

1. To label cells, pulse with 10 μM bromodeoxyuridine for 30 minutes. Harvest cells from culture.

2. Fix cells in 70% ethanol at +2-8°C for at least 30 min. Extract histones by resuspending cells in 1 mL chilled 0.1 M HCI containing 0.5% Triton X-100; incubate the suspension on ice for 10 minutes. Dilute acid with 5 mL distilled water and centrifuge at 200 x g for 10 min. Resuspend cells in 2 mL distilled water.

3. Denature cellular DNA by submerging the cell suspension into a boiling water bath for 10 min. Afterwards, quickly cool by placing the cell suspension in an ice slurry for several minutes. Wash cells in PBS that contains 0.5% Triton X-100.

4. Resuspend the cells (1-2 x 10 6 cells) in 100 μL of solution containing approximately 2 μg/mL anti-bromodeoxyuridine antibody diluted in PBS containing 0.1% BSA (0.2 μg/test). Incubate for 30 min at room temperature. Wash cells with PBS.

5. Resuspend cells in 100 μL of diluted goat anti-mouse IgG-FlTC Wash cells with PBS.

APPLICATIONS (Cont.)

Immunohistochemistry: Below is a procedure for staining cells that have been labeled with BrdU in vivo or in vitro. The procedure is based on the methods of B. Schutte et al. (1987) and D. Campana et al. (1988).

Preparation of tissue:

Inject animal with 50 mg BrdU/kg body weight. Sacrifice animal one hour later and remove organ or tissue under study. Embed tissue in OCT medium and snap-freeze by immersion into liquid nitrogen.Cut 4 mm frozen sections with a cryostat. Place sections on either albumin- or gelatin-coated slides.

Preparation of cells:

Pulse cells with 10 mM BrdU for 60 min. Cells grown on coverslips, or cytocentrifuge preparations made from cells grown in suspension, can be used for anti-bromodeoxyuridine staining according to the procedure below.

Procedure

1. Fix tissue sections or cells (on slide or coverglass) by immersing in absolute methanol for 10 minutes at +2-8°C. Air dry after removing from fixative. The slides can be stored at -20°C in a sealed box, or rehydrated to prepare for the assay procedure. To rehydrate, immerse in PBS for 3 min.

2. Denature DNA by incubating the slides in 2 N HCI for 60 min at +37°C.

3. Neutralize the acid by immersing the slides in 0.1 M borate buffer, pH 8.5. Change the buffer twice over a 10 min period.

4. Wash slides with PBS, changing the solution three times over a 10 min period.

5. Place slides in a humidified chamber (e.g., a sealed plastic box layered with wet paper towels) and cover cells with 150-300 μL of solution containing approximately 6 μg/mL anti-bromodeoxyuridine antibody diluted in PBS with 0.1% BSA. Incubate for 60 min at room temperature.

6. Wash slides with PBS, changing the solution three times over a 10 min period.

7. Apply optimal dilution of a second antibody conjugate (e.g., anti-mouse IgG-peroxidase), incubate, wash, and perform detection with a substrate that produces an insoluble product. After detection, counterstain with Harris-modified hematoxylin if desired. Slides can then be dehydrated and mounted.

抗BrdU抗体 クローンAH4H7-1／131-14871（マウスモノクローナル抗体）は、FC、ICC、IHCにおいて検証済みであり、ブロモデオキシウリジン（別名:BrdU）を検出できます。

研究のカテゴリ
エピジェネティクスおよび核機能

研究のサブカテゴリ
細胞周期、DNA複製および修復

ブロモデオキシウリジンに結合し、ヨードウリジン（10%）と交差反応します。抗ブロモデオキシウリジン抗体は、フルオロデオキシウリジンや、チミジンやウリジンなどの内因性細胞成分と交差反応しません。

150 mM塩化ナトリウムと0.1%アジ化ナトリウムを含有する10 mMリン酸緩衝液（pH 7.4）に溶解

フォーマット：精製品

精製プロテインA

保存期間は-20℃で出荷日から6ヵ月間です。凍結・融解サイクルの繰り返しを避けるため、分注してください。製品を最大限回収するために、溶解後のキャップを外す前に元のバイアルを遠心分離します。

対照
BrdU取り込み後のすべてのDNA含有分子種

先発品：MAB1467

濃度：ロットの具体的な濃度につきましては分析証明書をご参照ください。

CHEMICON is a registered trademark of Merck KGaA, Darmstadt, Germany

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