抗ピューロマイシン抗体、クローン4G11

ピューロマイシンは、細菌Streptomyces albonigerに由来するアミノヌクレオシド抗生物質であり、リボソームで早期の鎖終結により翻訳を阻害するタンパク質合成阻害薬として機能します。ピューロマイシンに対するモノクローナル抗体は、標準的な免疫化学的方法と共に用いて、翻訳を直接モニタリングすることができます。この方法はsurface sensing of translation（SUnSET）として知られています。分子の一部がアミノアシル化tRNAの3′末端に類似しているため、タンパク質翻訳解析に有用です。ピューロマイシンは、胸腺細胞とヒトHL-60白血病細胞でDNA断片化を誘導します。

ピューロマイシンを新合成タンパク質に組み込んでいます。この抗体は、ピューロマイシン存在下のみで、複数の分子量のピューロマイシンを組み込んだ新合成タンパク質を検出します。しかし、真核生物のタンパク質生合成阻害薬であるシクロヘキシミドが共存していると、シグナルの低下が認められます。

免疫細胞染色：希釈倍率1:2,000で使用、ピューロマイシンで処理したHeLa細胞において、ピューロマイシンを組み込んだ新合成タンパク質を検出できます。しかし、真核生物のタンパク質生合成阻害薬であるシクロヘキシミドを添加すると、シグナルの低下が認められます。

ウェスタンブロッティング：独立したラボの代表的なロットは、WBで、ピューロマイシンを組み込んだ新合成タンパク質を検出しました（David, A., et al. (2012). J Cell Biol. 197(1):45-57.; Schmidt, E., K., et al. (2009). Nat Methods. 6(4):275-277.）。

免疫蛍光：独立したラボの代表的なロットは、IFで、ピューロマイシンを組み込んだ新合成タンパク質を検出しました（David, A., et al. (2012). J Cell Biol. 197(1):45-57.; Schmidt, E., K., et al. (2009). Nat Methods. 6(4):275-277.）。

蛍光活性化セルソーティング：独立したラボの代表的なロットは、FACSで、ピューロマイシンを組み込んだ新合成タンパク質を検出しました（David, A., et al. (2012). J Cell Biol. 197(1):45-57.; Schmidt, E., K., et al. (2009). Nat Methods. 6(4):275-277.）。

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抗ピューロマイシン抗体、クローン4G11は、タンパク質に組み込まれたピューロマイシンを検出します。ピューロマイシンに対するモノクローナル抗体は、標準的な免疫化学的方法と共に用いることができます。

ピューロマイシンと共にプレインキュベートしたヒト試験サンプルと反応することが示されています。試験サンプルをピューロマイシンと共にインキュベートした場合、すべての種と反応すると予測されています。

フォーマット：精製

ピューロマイシンとシクロヘキシミドで処理した、またはピューロマイシンのみで処理したHEK293細胞ライセートのウェスタンブロッティングで評価されています。

ウェスタンブロッティング：希釈倍率1:12,500で使用、ピューロマイシンのみで処理したHEK293細胞ライセートのピューロマイシンを組み込んだ新合成タンパク質を検出できます。この抗体は、ピューロマイシンとシクロヘキシミドで処理したHEK293細胞中の少量のピューロマイシンも検出できます。

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