抗O-GlcNAc抗体、クローンCTD110.6

β-結合N-アセチルグルコサミン（β-GlcNAc）によるセリンまたはトレオニン残基のヒドロキシル部分を介したタンパク質の翻訳後修飾は、O-結合β-GlcNAcまたは単にO-GlcNAcと呼ばれます。O-GlcNAcは、すべての動植物の核細胞質画分に含まれる最も多い翻訳後修飾の一つです。O-GlcNAcは他のタイプのタンパク質糖化とは異なり、核画分と細胞質画分の中でのみ生じ、通常はさらに修飾されてより伸長した構造を形成することがありません。また、O-GlcNアシル化は高度に動的で可逆的なプロセスです。O-GlcNAcトランスフェラーゼ（OGT）は特定のセリンまたはトレオニン残基でO-GlcNAcをタンパク質に付着させ、O-GlcNAcaseはタンパク質からのO-GlcNAcの除去／加水分解を触媒します。実際に、O-GlcNアシル化とセリン／トレオニンリン酸化の間の活発な相互作用は、細胞シグナル伝達の調節において重要な役割を果たします。タウおよびRNAポリメラーゼII（Pol II）は、O-GlcNアシル化による修飾を受けることがよく知られる2つのタンパク質です。アルツハイマー病ヒト脳では、タウが広範囲にわたってリン酸化され、あまりO-GlcNアシル化されません。同様に、転写の伸長段階が始まると、ポリII CTDではO-GlcNAcが除去されてO-リン酸塩に入れ替わります。

O-GlcNアシル化タンパク質のサイズによって異なります。

O-GlcNAc修飾セリン残基を伴うKLH結合ペプチド。

エピトープ：β-O-結合GlcNAc。

ウェスタンブロッティング：1.0 µg/mLで使用、7.5～15 µgの野生型マウス胎児線維芽細胞（MEF）ライセートでO-GlcNアシル化タンパク質を検出しましたが、O-GlcNAcトランスフェラーゼ/OGT欠乏MEFライセートでは検出しませんでした（Natasha Zachara博士およびGokben Yildirir, M.S.の厚意による）。
ELISA：この抗体は、単独のO-GlcNアシル化セリンまたはトレオニンを伴うRNAポリメラーゼII C末端ドメイン（CTD）ペプチド（YSPTSPS）を検出しましたが、これに相当する未修飾ペプチドを検出しませんでした（Comer, F.I., et al. (2001).
この抗体は、ヒト多能性幹細胞（hPSC）由来のO-GlcNアシル化タンパク質を免疫沈降させました（Maury, J.J., et al. (2013).Stem Cell Res. 11(2):926-937）。
免疫沈降： この抗体は、HeLa細胞抽出物由来のO-GlcNアシル化タンパク質を免疫沈降させました（Comer, F.I., et al. (2001).293(2):169-177）。
ウェスタンブロッティング：この抗体は、未分化、分化中、および最終分化のヒト多能性幹細胞（hPSC）で、同等レベルの細胞O-GlcNアシル化を検出しました（Maury, J.J., et al. (2013).Stem Cell Res. 11(2):926-937）。
ウェスタンブロッティング：この抗体は、β-O-結合GlcNAcを伴うBSA結合RNAポリメラーゼII C末端ドメイン（CTD）ペプチド（YSPTSPS）を検出しましたが、α-O-結合GlcNAcを伴う場合と、これに相当する未修飾ペプチドを検出しませんでした。GlcNAcの存在は標的バンドの検出を無効にしましたが、GalNAcは無効にしませんでした（Comer, F.I., et al. (2001).293(2):169-177）。
ウェスタンブロッティング：この抗体は、HeLa核抽出物でO-GlcNアシル化タンパク質を検出し、さらに小麦胚芽凝集素（WGA）カラムによってHeLa核および細胞質抽出物から精製したO-GlcNアシル化タンパク質を検出しました。イムノブロッティングの前に免疫原ペプチドで抗体ブロッキングを行うと、標的バンド検出が無効になりました（Comer, F.I., et al. (2001).293(2):169-177）。
ウェスタンブロッティング：この抗体は、グルコサミニダーゼ阻害剤PUGNAcおよびヘキソサミン経路中間体グルコサミンで処理したJurkat細胞で、O-GlcNアシル化タンパク質のアップレギュレートを検出しました（Comer, F.I., et al. (2001).

抗O-GlcNAc抗体、クローンCTD110.6は、O-GlcNAcに対する抗体であり、ウェスタンブロッティング、ELISA、免疫沈降に使用できます。

研究のカテゴリ
シグナル伝達

研究のサブカテゴリ
一般的な翻訳後修飾

クローンCTD110.6は、β-O-結合GlcNAcを伴うセリンおよびトレオニン残基を検出しますが、α-O-結合GlcNAcの場合は検出しません。GlcNAcの存在は標的修飾の検出を無効にしますが、GalNAcは無効にしません。クローンCTD110.6は、未修飾のセリンおよびトレオニン残基を伴うペプチドを認識しません（Comer, F.I., et al. (2001).

標的となる修飾は、種特異的ではありません。

0.05%アジ化ナトリウムを含むPBS中の精製マウスモノクローナルIgMκ抗体。

フォーマット：精製

2～8°Cで受領日から1年間安定です。

HeLa細胞ライセートでウェスタンブロッティングにより評価。

ウェスタンブロッティング：4.0 µg/mLで使用、10 µgのHeLa細胞ライセート中のO-GlcNアシル化タンパク質を検出できます。

濃度：ロットに固有のデータシートを参照してください。

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