Fibroblastes embryonnaires primaires de souris EmbryoMax^®

Avec la gamme EmbryoMax, les chercheurs disposent d'une solution de culture de cellules souches embryonnaires simple et efficace qui leur évite les longues étapes d'isolement et de préparation des cellules nourricières. Bon nombre de protocoles de culture de cellules souches embryonnaires nécessitent l'utilisation de fibroblastes embryonnaires primaires de souris (cellules PMEF). Dans ces protocoles, les cellules souches embryonnaires sont généralement cultivées sur une monocouche de cellules PMEF nourricières. Les cellules nourricières jouent deux rôles clés dans la culture de cellules souches : elles sécrètent plusieurs facteurs de croissance essentiels dans le milieu, contribuant à maintenir la pluripotence, et fournissent une matrice cellulaire pour la croissance des cellules souches embryonnaires.

Les fibroblastes embryonnaires primaires de souris (MEF), résistants à la néomycine, souche FVB, ne sont pas traités à la mitomycine C et servent de couche nourricière pour les cellules SE/SPi humaines et de souris. Les cellules MEF sont résistantes à la néomycine. Les cellules sont fournies au stade du 3e repiquage et peuvent être encore multipliées avant congélation pour un usage ultérieur.

Mise en culture de cellules nourricières MEF

Procédure :

1. Avant de décongeler les cellules nourricières PMEF, enduire des plaques/flacons de solution de gélatine.
2. Décongeler rapidement un ou plusieurs flacons de PMEF dans un bain-marie à 37 °C puis les transférer dans un tube de 15 ml (contenant déjà 10 ml de milieu pour cellules nourricières PMEF tiède). Retourner doucement le tube et le centrifuger à 300 × g pendant 4 à 5 minutes.
3. Retirer le surnageant et remettre en suspension le culot de cellules dans du milieu pour cellules nourricières tiède.
4. Retirer des plaques/flacons la solution de gélatine, et diviser en aliquotes la suspension de cellules nourricières PMEF selon les densités recommandées dans le Tableau 4.1 du guide des protocoles pour cellules SE de souris.
5. Incuber les cellules nourricières PMEF à 37 °C avec 5 % de CO2. Utiliser les Figures 4A, B et C du guide des protocoles pour cellules SE de souris pour estimer la bonne densité et le bon aspect des PMEF. Les plaques enduites de gélatine peuvent être utilisées pendant 12 à 14 jours.

Cellules PMEF, résistantes à la néomycine, souche FVB, non traitées, faible nombre de repiquages (P3)

Fibroblastes embryonnaires primaires de souris

5-6 × 10⁶ cellules

Les cellules sont fournies sous forme congelée en flacons individuels contenant environ 5-6 × 10⁶ fibroblastes par flacon. Elles sont vendues par boîte de 5 flacons, au stade du 3e repiquage.

Après réception, les flacons doivent être conservés à -80 °C. Pour une durée de conservation supérieure à 6 mois, le flacon se conserve pendant 2 ans dans de l'azote liquide en phase gazeuse (s'assurer que le bouchon est hermétiquement fermé).

EmbryoMax is a registered trademark of Merck KGaA, Darmstadt, Germany