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Lyo ECM 젤: 2차원 및 3차원 세포 배양을 위한 새로운 동결건조 기저막 추출물

섹션 개요

기저막 추출물이란 무엇인가?
Lyo ECM 젤: 동결건조 기저막
Lyo ECM 젤 세포 배양 응용 분야

기저막 추출물이란 무엇인가?

기저막 추출물(BME)은 엥겔브레트-홀름-스웜(EHS) 마우스 육종에서 유래한 콜라겐 IV, 엔택틴, 라미닌, 헤파란 설페이트 프로테오글리칸을 포함한 세포외 기질(ECM) 단백질의 복합 혼합물입니다. BME는 상피세포 및 내피세포를 위한 자연 기저막을 모방한 표면 코팅으로 세포를 지지하며, 시험관 내에서 세포에 생화학적 신호와 기계적 안정성을 제공합니다.

연구자들은 BME를 전통적인 2차원 및 더 발전된 3차원 세포 배양 시스템에서 스캐폴드로 사용하여 오가노이드 배양을 확립하고, 혈관 신생을 모델링하며, 종양 침습을 연구하고, 세포-기질 상호작용을 조사합니다. 종양 유래 BME는 더 생리학적으로 관련성 높은 모델을 위해 미세환경을 재현하므로 줄기세포 연구와 발달 및 암 생물학 연구에 자주 사용됩니다. 그러나 배치별 변동성과 정의되지 않은 조성으로 인해 일관성과 전환 가능성이 개선된 합성 및 재조합 BME 대안이 개발되었습니다.

Lyo ECM Gel: 동결건조 기저막

Lyo ECM Gel(E1272)은 세포 배양용 ECM 겔의 동결건조 버전입니다. 생쥐 육종에서 유래한 조절 가능하고 안정적이며 사용하기 쉬운 재료를 제공하며, 자연적인 ECM을 모방하고 세포 부착, 성장 및 기능을 지원하는 생물학적 환경을 제공합니다. 본 제품은 사용자가 정의한 농도로 재구성되도록 설계되어 기존 ECM 겔보다 다양한 생물학적 응용 분야에 더 큰 유연성을 제공합니다.

특징 및 장점

취급 용이성: 실온 보관 및 취급 가능.
필요할 때 바로 사용 가능: 물만 추가하면 즉시 사용 가능.
유연성: 오가노이드와 같이 배양이 어려운 응용 분야를 위해 젤 농도를 조절할 수 있습니다.
글로벌 배송/물류 용이성

Lyo ECM 겔 사용 방법

1단계

Lyo ECM Gel lyophilized bottle Alt text: A glass bottle of the lyophilized ECM gel halfway filled with the lyophilized product.

Lyo ECM 젤을 손에 넣으세요

2단계

The product bottle of the rehydrated EDM gel, slanted and facing the top right corner. Fingers hold the bottle top.

ECM 젤에 물을 첨가하여 재수화하십시오

3단계

Two piles of 96 well plates, one stacked in the background with one plate slanted and leaning in front, and one group of four plates in a pile on top of each other.

배양 또는 분석을 수행하기 위해 웰 플레이트에 세포를 추가하십시오.

Lyo ECM 겔 세포 배양 응용 분야

혈관신생 분석법

기존 혈관계로부터 새로운 모세혈관이 형성되는 과정인 혈관신생은 생물학적 발달, 상처 치유 및 조직 재생에 필수적인 고도로 조절되는 과정입니다. 조절 장애를 보이는 혈관신생은 만성 염증, 허혈성 질환, 당뇨병성 망막병증, 암 등 다양한 병리의 특징입니다. 혈관신생 분석법을 통해 연구자들은 새로운 혈관 형성의 기초가 되는 세포 및 분자적 사건을 연구할 수 있습니다. 일반적인 실험적 접근법으로는 내피세포 증식 및 이동 분석, 관형성형 분석, 대동맥 고리 및 융모양막(CAM) 모델, 생체 내 Matrigel^® 플러그 및 종양 혈관신생 분석 등이 있습니다.

이미지는 여섯 개의 이미지로 분할됩니다. 상단 이미지는 명시야 현미경으로 시각화되었습니다. 오른쪽 상단 이미지는 ECM이 없는 인서트이며 투명하게 보입니다. 중앙 상단 이미지는 Lyo-ECM 겔에 시드된 세포로, 단일 세포층을 보여줍니다. 오른쪽 상단 이미지는 Matrigel에 시드된 세포로, 마찬가지로 단일 세포층을 보여줍니다. 아래 세 장의 이미지는 형광 현미경으로 관찰한 것입니다. 오른쪽 상단 이미지는 ECM이 없는 인서트이며 배경 형광을 보여줍니다. 가운데 상단 이미지는 Lyo-ECM 겔에 배양된 세포로, 칼세인 염색을 통해 단일 세포층을 보여줍니다. 오른쪽 상단 이미지는 Matrigel에 배양된 세포로, 칼세인 염색을 통해 단일 세포층을 보여줍니다.

그림 1. 혈관신생 분석법.15K 인간 정맥 내피 세포(HUVECs)를 재구성된 Lyo ECM 젤 또는 Matrigel^®로 코팅된 웰에 시드하고, PMA(50ng/ml)를 함유한 배지에서 24시간 배양하였다. 세포를 칼세인-AM(1mM)으로 염색하였다.

세포 침습 및 이동 분석법

세포 이동은 조직 발달, 상처 치유, 질병 진행 및 면역 감시를 주도하는 근본적인 생물학적 과정입니다. 그러나 비정상적인 세포 이동은 섬유증, 암 전이 및 만성 염증과 같은 병리학적 상태에 기여할 수 있습니다. 이동 분석을 통해 연구자들은 특정 자극이나 환경 조건에 대한 세포의 움직임을 평가하고, 이동 방향성, 운동성 메커니즘 및 속도와 같은 세포 역학에 대한 정성적 및 정량적 통찰력을 얻을 수 있습니다. 이동 분석법에는 스크래치 또는 상처 치유 분석법, 트랜스웰 또는 보이든 챔버 분석법과 같은 단순한 2차원 모델부터 조직과 유사한 환경을 모방한 고급 3차원 시스템까지 포함될 수 있습니다.

세포 수 총 평균

막대 그래프는 세포 수를 나타내며, 밀리셀® 인서트에서 FBS가 첨가된 Lyo ECM 겔 배지에서 배양된 HT1080이 가장 많은 세포 수를 보였습니다. MCF7은 가장 적은 세포 수를 나타냈습니다.

그림 2. 세포 이동 분석.25K HT1080, NIH3T3 및 MCF7 세포를 대상으로 보이드 챔버 분석법을 이용해 세포 이동성을 분석하였다. Millicell^® 세포 배양 인서트(PTEP24H48)에 Lyo ECM 겔/Matrigel^®을 코팅하고, 이동을 유도하기 위해 배양 배지에 FBS를 첨가하거나 첨가하지 않은 조건으로 처리하였다.

3D 오가노이드 배양

오가노이드 배양은 기존 2차원 세포 배양 모델보다 원생 조직의 구조적·기능적 복잡성을 더 정확하게 모방하는 진보된 생리학적 관련성 3차원 시스템입니다. 오가노이드를 성공적으로 생성하고 장기적으로 유지하는 데 가장 중요한 요소 중 하나는 세포외 기질(ECM)입니다. 코닝^® 매트리지엘^®은 체외 오가노이드 배양에 가장 널리 사용되는 ECM입니다. 연구자들은 종종 배양 접시 표면에 중합된 작은 3D 형태의 Matrigel^® 방울인 "Matrigel^® 돔"을 세포나 오가노이드 배양을 위한 지지대로 사용합니다.

위장관 오가노이드의 패스리지 0 또는 5 상태 이미지 4점. 우측 상단 이미지는 패스리지 0 상태의 Lyo-ECM 겔에서 배양된 SCC322로, 세포들이 원형으로 모여 있는 모습을 보여줍니다. 좌측 상단 이미지는 패스리지 5 상태의 Lyo-ECM 겔에서 배양된 SCC322로, 세포들이 원형으로 더 조밀하게 배열된 모습을 보여줍니다. 오른쪽 아래 이미지는 패스리지 0에서 Matrigel® 배지에서 배양된 SCC322로, 세포들이 원형으로 모여 있는 모습을 보여줍니다. 왼쪽 아래 이미지는 패스리지 5에서 Matrigel® 배지에서 배양된 SCC322로, 세포들이 원형으로 더 조밀하게 배열된 모습을 보여줍니다. 5회 패스리지 후 두 조건 간 형태학적 및 세포 건강 상태에 차이는 관찰되지 않았습니다.

그림 3. 위장관 오가노이드 배양.인간 십이지장 장기유사체(SCC322)를 Lyo ECM 겔 또는 Matrigel^® 돔에서 장기유사체 확장 배지로 5회 배양했다. 5회 배양 후 두 조건 간 형태학적 특징과 세포 건강도에 차이는 관찰되지 않았다.

신경돌기 성장 분석법

신경돌기(축삭과 수상돌기를 포함할 수 있음)는 신경세포의 세포체에서 뻗어 나온 돌기들로, 그 성장은 신경 발달, 재생 및 시냅스 네트워크 형성의 근본적인 단계이다. 신경돌기 성장 분석법은 신경세포 분화, 축삭 및 수상돌기 형성, 신경 연결성을 조절하는 과정을 연구하기 위해 널리 사용되는 실험법이다. 신경돌기의 시작, 연장, 분지 및 유도 과정을 정량화함으로써, 이 분석법은 신경 가소성과 회복을 조절하는 분자적 메커니즘에 대한 중요한 통찰력을 연구자들에게 제공한다.

PC12 세포의 12개 이미지. 상단 이미지 세트는 24시간 후 단독 배양, Lyo ECM 젤, ECM 젤 또는 Matrigel® 배지에서 배양된 PC12 세포를 보여줍니다. 중간 이미지 세트는 48시간 후 단독 배양, Lyo ECM 젤, ECM 젤 또는 Matrigel® 배지에서 배양된 PC12 세포를 보여줍니다. 하단 형광 현미경 이미지 세트는 48시간 후 단독 배양, Lyo ECM 젤, ECM 젤 또는 Matrigel® 배지에서 배양된 PC12 세포를 보여줍니다.

그림 4. PC12 세포의 분화.PC12 신경세포를 중합된 ECM 젤, Lyo ECM 젤 또는 Matrigel^® 위에 24웰 플레이트에서 48시간 동안 배양하였다. 매트릭스 없이 PC12만 배양한 것을 음성 대조군으로 사용하였다. 48시간 분화 후 ECM 젤 조건에서 신경돌기 형성을 검출하였다.