Impuretés liées aux procédés et aux produits
De nombreuses impuretés sont présentes dans le processus de fabrication des anticorps monoclonaux ou sont générées au cours de celui-ci, notamment des contaminants liés au procédé ou au produit qui peuvent compromettre le programme de développement de votre biothérapie. Heureusement, nous disposons de nombreuses années d’expérience dans la réalisation de dosages, tant en R&D que dans des environnements conformes aux BPF, ce qui nous permet de répondre aux exigences en matière de données à chaque phase du cycle de développement. Grâce à une instrumentation de pointe et à des délais d’exécution rapides, nous fournissons des résultats fiables pour faire avancer votre projet.
Évaluation des impuretés de fabrication
Afin de répondre aux besoins d’analyse concernant les impuretés de processus suivantes, nous proposons des gammes de dosages couvrant les contaminants de processus, les protéines et l’ADN des cellules hôtes, ainsi que les additifs de processus.
Contaminants issus des cellules hôtes : lors de la fabrication d’anticorps monoclonaux, des impuretés de procédé peuvent provenir de la cellule hôte utilisée pour l’expression de votre médicament. Les impuretés liées aux protéines des cellules hôtes (HCP), présentes à des concentrations de l’ordre du ppm dans les biothérapies, constituent un risque majeur d’immunogénicité, car elles peuvent déclencher une réponse immunitaire imprévisible chez les patients. Leur nature complexe et variée rend leur détection et leur surveillance particulièrement difficiles. Les critères d’acceptation pour l’ADN résiduel de la cellule hôte étant généralement fixés à un niveau très bas (souvent ≤ 1,0 pg d’ADN par mg de substance médicamenteuse), il est essentiel de disposer de techniques d’élimination efficaces et de méthodes de détection sensibles.
Additifs de fabrication : une grande variété d’additifs de fabrication doit être surveillée au cours du développement et de la fabrication des anticorps monoclonaux. Il s’agit notamment des détergents, de la protéine A, des réactifs de transfection, des antibiotiques, des agents antimousse et des facteurs de croissance.
Batterie microbienne : de nombreux anticorps monoclonaux sont produits dans des organismes microbiens afin de bénéficier de taux de croissance rapides et de rendements élevés, ce qui rend importante la surveillance et le contrôle de la présence de contaminants microbiens. Un composant de la paroi cellulaire des bactéries Gram-négatives, appelé endotoxine, provoque des réactions allant de la fièvre et des frissons à un choc septique mortel. Son élimination de votre anticorps monoclonal est non seulement essentielle, mais également une exigence réglementaire. Des tests de charge microbienne doivent être effectués tout au long du processus de fabrication des anticorps monoclonaux, et les tests de stérilité sont également importants pour garantir l’intégrité de la production.
Évaluation des impuretés du produit
Afin de répondre aux besoins de test concernant les impuretés de produit suivantes, nos gammes de tests de détection des contaminants sont structurées en fonction des variantes de taille, des variantes de charge ou des caractéristiques microbiologiques (viables ou non viables).
Répartition des charges : résultant de modifications post-traductionnelles (PTM) au cours du processus de fabrication, ou dues à des modifications chimiques tout au long de la purification et du stockage, les variantes de charge peuvent avoir un impact considérable sur l’activité biologique et la pharmacocinétique d’un anticorps monoclonal. L’analyse des variantes de charge est une exigence réglementaire pour les anticorps monoclonaux ; elle fait appel à des techniques telles que la chromatographie d’échange cationique (CEX) et la focalisation isoélectrique capillaire (cIEF).
Distribution de taille : le matériel de production initial contient souvent des variantes de taille telles que des agrégats, des fragments et des biomolécules présentant des chaînes légères supplémentaires. Comme celles-ci sont susceptibles d’affecter l’immunogénicité et la puissance, il est important de surveiller leur présence. La chromatographie d’exclusion stérique (SEC) est la méthode la plus couramment utilisée pour évaluer la distribution granulométrique, tandis que des techniques telles que la diffusion dynamique de la lumière (DLS) et l’électrophorèse capillaire sur gel de dodécylsulfate de sodium (CE-SDS) sont également très instructives.
Analyse du poids moléculaire : Le poids moléculaire est un indicateur majeur de l’identité d’un anticorps monoclonal ; il est influencé par la nature des chaînes légères et lourdes ainsi que par les modifications post-traductionnelles (PTM). Généralement évalué par analyse de masse intacte (IM), le poids moléculaire de l’anticorps monoclonal peut également être étudié en déglycosylant les chaînes lourdes afin d’éliminer l’une des principales sources d’hétérogénéité protéique.
Cartographie des séquences : technique de cartographie des séquences largement utilisée pour déterminer l’identité des anticorps monoclonaux, la cartographie peptidique va de la génération de cartes peptidiques à l’aide d’une seule enzyme à des analyses plus complexes telles que l’acquisition dépendante des données (DDA) ou les méthodes de dissociation activée par collision (CAD). Ces informations peuvent être enrichies à l’aide d’un séquençage N- ou C-terminal, ou de la spectrométrie de mobilité ionique.
Analyse des modifications : la compréhension et le contrôle des modifications survenant au cours du processus de fabrication contribuent à obtenir un produit anticorps monoclonal homogène. Par exemple, la cartographie des N-glycanes peut fournir des informations sur la stabilité, la bioactivité et l’immunogénicité de l’anticorps monoclonal, tandis que la quantification de l’acide sialique est essentielle pour prévenir une sialylation excessive. Il est également judicieux de réaliser une cartographie des ponts disulfure, car on sait que la réduction de ces ponts induite par le processus de fabrication entraîne de faibles rendements lors de la récolte des anticorps monoclonaux.
Contrôles des caractéristiques physiques : De nombreuses propriétés physiques d’un anticorps monoclonal doivent être contrôlées au cours de la fabrication. Il s’agit notamment du pH, de la concentration et de l’osmolalité, qui sont toutes des caractéristiques essentielles à la fabrication d’un produit pharmaceutique homogène.
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