抗MLKL抗体 クローン3H1

MLKL（別名：混合型キナーゼドメイン様タンパク質）はMLKL遺伝子にコードされており、例えば、TNF-α誘導性壊死に応答したプログラム壊死またはネクロトーシスの実行に必要とされる興味深いタンパク質です。MLKLは、ネクロトーシスによって腫瘍壊死因子（TNF）誘導性細胞死を引き起こす多重タンパク質複合体である「ネクロソーム」の構成要素です。TNF-αに誘導されるプログラム壊死には、受容体と相互作用するセリン・スレオニンキナーゼRIP1とRIP3の活性も必要であり、これらもまた、混合型キナーゼドメイン様タンパク質MLKLと直接的に相互作用します。RIP3はネクロトーシスに不可欠な上流キナーゼです。偽キナーゼであるMLKLは、RIP3の基質として機能して下流のシグナル伝達を媒介し、複合体を形成してRIP3-MLKL複合体となると、AMP-PNPによって安定化されて不活性型の立体構造をとります。

実測値：約52 kDa。算出値：54.48/30.28 kDa（ヒトアイソフォーム1/2）および54.32/53.38 kDa（マウスアイソフォーム1/2）。一部の細胞ライセートでは、特性が明らかになっていないバンドが認められることがあります。

エピトープ：Brace領域。

マウスMLKLの2ヘリックスリンカー（Brace）領域のN末端から偽キナーゼドメインまでの配列に対応するKLH結合直鎖ペプチド（Hildebrand, J.M., et al. (2014).Proc.Natl.Acad.Sci. U.S.A.111(42):15072-15077; Murphy, J.M., et al. (2013).Immunity.39(3):443-453）。

この抗MLKL抗体 クローン3H1は、免疫細胞染色、免疫沈降、ウェスタンブロッティングにおける使用について検証済みであり、MLKLを検出できます。

免疫細胞染色：この抗体は、野生型マウスでは皮膚線維芽細胞（MDF）中のMLKLを検出しますが、Mlkl-/-マウスでは検出されません（オーストラリアのWalter and Eliza Hall Institute、James M. Murphy教授の厚意による）。

免疫沈降： この抗体は、ドキシサイクリン誘導性の野生型マウスMLKL発現構成体を有するMlkl- /-マウス皮膚線維芽細胞（MDF）の可溶性抽出物から、ドキシサイクリン処理後にのみMLKLを免疫沈降させ、ドキシサイクリン処理前にはMLKLの免疫沈降は認められませんでした（Murphy, J.M., et al. (2013).Immunity.39(3):443-453）。

ウェスタンブロッティング：この抗体は、Mlkl- /-マウス由来のマウス皮膚線維芽細胞（MDF）に外因性に発現したマウスおよびウマのMLKL N末端フラグメント（それぞれaa.1～180および1～189）のQ-VD-OPh（TSQ；カタログ番号：551476）処理誘導性の膜輸送を検出しました（Tanzer, M.C., et al. (2016).Cell Death Differ.In press）。

ウェスタンブロッティング：この抗体は、ヒトHT-29およびU937細胞中のMLKLを検出しました（Tanzer, M.C., et al. (2015).Biochem.J. 471(2):255-265）。

ウェスタンブロッティング：この抗体は、Q-VD-OPh（TSQ；カタログ番号：551476）処理によりマウス皮膚線維芽細胞（MDF）におけるMLKLの膜移行を検出しました（Tanzer, M.C., et al. (2015).Biochem.J. 471(2):255-265; Hildebrand, J.M., et al. (2014).Proc.Natl.Acad.Sci. U.S.A.111(42):15072-15077）。

ウェスタンブロッティング：この抗体は、L292マウス線維芽細胞、マウス皮膚線維芽細胞（MDF）、マウス胚線維芽細胞（MEF）、野生型の骨髄由来マクロファージ（BMDM）におけるMLKL発現を検出しましたが、Mlkl- /-マウスでは検出されませんでした（Cook, W.D., et al. (2014).Cell Death Differ.21(10):1600-1612; Murphy, J.M., et al. (2013).Immunity.39(3):443-453）。

ウェスタンブロッティング：この抗体は、リコンビナント・完全長マウスMLKL、アミノ酸1～180位および124～464位のMLKL断片を検出しましたが、a.a.1～125および179～464のMLKL断片を検出しませんでした（Hildebrand, J.M., et al. (2014).Proc.Natl.Acad.Sci. U.S.A.111(42):15072-15077）。

ウェスタンブロッティング：この抗体は、野生型マウスにおいて、脳を除き試験したすべての組織でMLKL発現を検出しましたが、Mlkl- /-マウスの組織では標的バンドは認められませんでした（Murphy, J.M., et al. (2013).Immunity.39(3):443-453）。

フォーマット：精製品

精製ラットIgG抗体、150 mM塩化ナトリウムと0.05%のアジ化ナトリウムを含有する0.1 Mトリス-グリシン緩衝液（pH 7.4）に溶解。

マウス心臓組織ライセートにおいてウェスタンブロッティングにより評価済み。

ウェスタンブロッティング：0.5 µg/mLで使用、マウス心臓組織ライセート10 µg中のMLKLを検出できます。

濃度：ロットの具体的な濃度につきましては分析証明書をご参照ください。