Diaforasa from Clostridium kluyveri

La diaforasa de Clostridium kluyveri, o lipoil deshidrogenasa, se ha utilizado en un estudio para evaluar las interacciones proteína-proteína en el ensamblaje del ácido lipoico en las 2-oxoácido deshidrogenasas del metabolismo aerobio. La lipoil deshidrogenasa también se ha utilizado en un estudio para investigar la regulación rédox de la nitración de la tirosina y la reducción de la 3-nitrotirosina por antioxidantes.

Se analizaron plataformas de nanopartículas de poliacrilamida (NP) que contenían azul de metileno (MB) en disolución con diaforasa de Clostridium kluyveri y el cofactor NADH. Esta prueba se realizó para comprobar si la encapsulación del azul de metileno en las plataformas podría evitar la reducción del azul de metileno y, por tanto, proteger su eficacia fotodinámica. La enzima de Sigma se ha utilizado junto con la aldehído deshidrogenasa para construir un biosensor del acetaldehído mediante inmovilización. También se ha utilizado en la reoxidación entre NADP y NADPH. Esta reacción catalizó simultáneamente la conversión de resazurina en la muy fluorescente resorufina, y también permitió la detección de cantidades diminutas de NAADP. El NAADP fue convertido inicialmente a NADP y NADPH por otras enzimas.

El nombre «diaforasa» se ha aplicado vagamente a diversas enzimas que catalizan la oxidación del β-NADH o el β-NADPH en presencia de un aceptor de electrones, como el azul de metileno o el 2,6-diclorofenolindofenol. Se utilizan muchos procedimientos analíticos y «unidades» diferentes.
Se conocen diaforasas que son específicas del β-NADH o del β-NADPH. La enzima de corazón de cerdo de Straub parece tener actividades diaforasa (específica del β-NADH) así como lipoico y lipoamida deshidrogenasa. Se ha comunicado que es una sola proteína. Sin embargo, según Massey, la «diaforasa» es probablemente una lipoamida deshidrogenasa desnaturalizada. La preincubación de la preparación de corazón de cerdo con Cu²⁺ reduce la actividad lipoamida deshidrogenasa y aumenta proporcionalmente la actividad β-NADH diaforasa. En nuestro laboratorio hemos demostrado cierto grado de este efecto del cobre en la enzima cardiaca del cerdo, pero no se observaron efectos apreciables en las preparaciones de Clostridium kluyveri o la levadura tórula. La proporción lipoamida deshidrogenasa:diaforasa es una medida de la desnaturalización.

Una unidad de «diaforasa» o «lipoil» deshidrogenasa oxidará 1,0 μmol de β-NADH por minuto a pH 7,5 y 25 °C, con la correspondiente reducción del 2,6-diclorofenolindofenol

Se vende en función de las unidades de diaforasa nativa.