Colorantes para geles de electroforesis de proteínas

Soluciones de fijación

Tras la electroforesis en gel, las proteínas suelen «fijarse» en el gel para evitar su dispersión antes de la tinción. Algunos colorantes para geles contienen sustancias químicas que eliminan la necesidad de fijar los geles antes de la tinción.

Colorantes
colorimétricos para geles de proteínas

• El azul brillante de Coomassie se utiliza para teñir proteínas en geles de poliacrilamida mediante interacciones electrostáticas con los grupos amino y carboxilo de las proteínas.
• El colorante para geles de proteínas ReadyBlue™ es un colorante coloidal de Coomassie rápido y sensible para geles de poliacrilamida que se suministra como una solución lista para usar, lo que permite un protocolo más rápido y simplificado. ReadyBlue™ puede visualizarse mediante métodos colorimétricos o de fluorescencia IR.  Esta fórmula segura no contiene disolventes orgánicos ni ácido fosfórico y puede reutilizarse hasta tres veces. Se ha demostrado con ReadyBlue™ una sensibilidad de hasta 2 ng por banda.
• El reactivo de tinción para geles EZBlue™ es un colorante coloidal de proteínas Coomassie Brilliant Blue G-250, práctico, sensible y seguro, que mejora los resultados de la electroforesis de proteínas al tiempo que reduce significativamente el tiempo de tinción. Al ser un colorante coloidal, reacciona únicamente con las proteínas, no con el gel en sí. Se reduce la tinción de fondo, por lo que las bandas de proteínas pueden visualizarse casi inmediatamente en geles de poliacrilamida y membranas de PVDF. No se requiere ningún paso de destinción, aunque un lavado con agua puede intensificar las bandas y aclarar el fondo. El reactivo EZBlue™ es extremadamente sensible, ya que detecta cantidades tan pequeñas como 5 ng de proteína.
• El kit de detección reversible de proteínas es un sistema de detección único diseñado para la tinción de proteínas en membranas de nailon, nitrocelulosa y PVDF o en geles PAGE, con una sensibilidad de detección similar a la de los colorantes de Coomassie. La mayoría de los demás colorantes producen un fondo elevado en las membranas de nailon debido a las fuertes interacciones de carga con la membrana. La tinción es fácilmente reversible con una solución de EDTA, de modo que la membrana puede reutilizarse para el Western blot o para el análisis de la secuencia de aminoácidos.
• El colorante azul negro de naftol puede utilizarse para teñir proteínas en geles de poliacrilamida, geles de agarosa y membranas de nitrocelulosa. Tras la electroforesis, se recomienda fijar las proteínas en el gel. A continuación, el gel se tiñe con azul de naftol negro al 0,1 % en ácido acético al 7 % (v/v) durante al menos 2 horas y se des tiñe con una solución de ácido acético al 7 % (v/v). La sensibilidad de detección es aproximadamente el 20 % de la del azul de Coomassie
• El kit de tinción con plata ProteoSilver™, que ofrece la mayor sensibilidad, tiene una sensibilidad de ≥0,1 ng de proteína por banda con un tiempo de incubación de 3 a 12 minutos. Esta tinción se recomienda para proteínas de muy baja abundancia y es compatible con aplicaciones MALDI-TOF.

Tintes fluorescentes para geles de proteínas

• El colorante fluorescente para geles de proteínas EZFluor™ de un solo paso es un colorante listo para usar que solo requiere un único paso de tinción de entre 5 y 30 minutos sin fijación y puede detectar cantidades tan pequeñas como aproximadamente 1-10 ng de proteína por banda. La tinción es totalmente compatible con la espectrometría de masas y la secuenciación basada en Edman.
• El colorante fluorescente para geles de proteínas EZFluor™ UV de un solo paso es un colorante listo para usar, diseñado para la visualización mediante un transiluminador UV y un filtro de bromuro de etidio, compatible con la espectrometría de masas.
• El colorante para geles de proteínas SYPRO^® Ruby es un colorante fluorescente ultrassensible y listo para usar, destinado a la detección de proteínas separadas mediante electroforesis en gel de poliacrilamida (PAGE). Este colorante, diseñado especialmente para su uso en PAGE 2-D, ha demostrado ser una excelente opción también para geles de PAGE 1-D y de focalización isoeléctrica (IEF). El colorante para geles de proteínas SYPRO^® Ruby alcanza una sensibilidad comparable a la de muchas técnicas de tinción con plata. 
• SYPRO^® Orange es similar a SYPRO^® Red, aunque es algo más brillante y presenta una fluorescencia de fondo ligeramente superior. El colorante se excita eficazmente con luz UV o de banda ancha. No es adecuado para la tinción de proteínas en blots o en geles de IEF y presenta una sensibilidad reducida al teñir proteínas en geles 2-D.

Reactivos de descoloración

• CoZap se utiliza para la eliminación rápida de la tinción con azul de Coomassie. La exclusiva almohadilla CoZap se coloca directamente en la bandeja de destinción y absorbe todo el colorante libre de la solución, lo que elimina la necesidad de cambiar la solución de destinción.