抗HNEマイケル付加体抗体、還元型

HNE修飾タンパク質のサイズによって異なります。一部のライセートに特性評価されていないバンドが認められる場合があります。

脂質過酸化の際に生成される反応性アルデヒドは、酸化ストレスに関連する細胞および組織の損傷に関与しています。多価不飽和脂肪酸（PUFA）の酸化により生成される4-ヒドロキシ-2-ノネナール（HNE）、4-オキソ-2-ノネナール（ONE）、アクロレインなどのアルファ、ベータ-不飽和カルボニル化合物は、タンパク質上の求核性基と容易に相互作用して、分子内または分子間のタンパク質架橋を生じさせます。2種類のHNE修飾があり、第1のタイプはリジンアミン、ヒスチンイミダゾール、またはシステインスルフヒドリルとの1:1マイケル付加反応によって形成されます。第2のタイプは、1つのHNEが2つのN-アルファ-アセチルリジン(NAL）由来の2つの遊離アミン基と同時に反応する、いわゆるマイケル-シッフ塩基付加により形成されます。後者の場合、最初の非蛍光性2:1リジン-HNEマイケル付加体-シッフ塩基はさらに酸化的環化されて、一般にHNEフルオロフォアと呼ばれる蛍光性2-ヒドロキシ-3-イミノ-1,2-ジヒドロピロール誘導体を形成します。可逆的に形成されたHNE-Lysマイケル付加体は安定ではなく、タンパク試料中のLys HNE修飾を保護するために、しばしば水素化ホウ素ナトリウム（NaBH4）による還元が用いられます。NaBH4処理による還元的安定化は、衝突誘起解離（CID）および電子移動解離（ETD）MS/MSの際に、逆マイケル付加反応（RMA）によって4-HNE-Cysマイケル付加体から4-HNEが失われるのを防ぐためにも用いられます。

水素化ホウ素ナトリウムで化学的に還元したHNE修飾KLH。

アプリケーションノート：
1.ABN249は、Calbiochem 393207の代替品です。ABN249は、免疫細胞染色および免疫組織染色において機能すると考えられています。これらの2種類のアプリケーションにおける試料調製および検出の例は、以下の393207の引用文献を参照してください。

Usatyuk, P.V., et al. (2006). J. Biol. Chem. 281(46):35554-35566 （免疫細胞染色）。
McCormack, A.L., et al. (2005). J. Neurochem. 93(4):1030-1037（免疫組織染色）。

2.抗HNEフルオロフォア、カタログ番号：393206は、ELISA、免疫組織染色、ウェスタンブロッティングによるHNEフルオロフォアの検出にも使用できます

3.ウェスタンブロッティングのポジティブコントロールを作製するには、0.1～0.5 mMのHNEを用いて10 mM KH2PO4中の2 mg/mL BSA溶液、pH 7.4を処理し、37°Cで1時間インキュベートしてください。反応は、224 nmのHNE吸光度の減少によってモニタリングできます（消光係数13,750/M）。遊離HNEは化学反応後にゲルろ過と透析により除去できます。

タンパク質溶液中のHNEマイケル付加体は、ABN1348を用いた解析を行う前に、水素化ホウ素ナトリウム(NaBH4)により化学的に還元する必要があります。新たに調製した1 mM NaOH中の100 mM NaBH4溶液を、タンパク質試料溶液に1:9（V:V）で加え、最終NaBH4濃度を10 mMとします。タンパク溶液を室温で10～30分間保持した後、5～10モル当量のアセトンを加えて急冷します。

抗HNEマイケル付加体抗体、還元型、カタログ番号：ABN249は、4-ヒドロキシ-2-ノネナールマイケル付加体の還元型を特異的に検出するウサギポリクローナル抗体であり、ウェスタンブロッティングでテストされています。

このポリクローナル抗血清は、水素化ホウ素ナトリウムで還元した後のみにHNE修飾BSAを検出し、還元前は検出しません。

標的となる修飾は、種特異的ではありません。

コントロール
水素化ホウ素ナトリウムで化学的に還元したHNE修飾BSA。

還元HNE-BSAのウェスタンブロッティングで評価されています。

ウェスタンブロッティング：希釈倍率1:10,000で使用、水素化ホウ素ナトリウムで還元した後のみに10 ngのHNE修飾BSAを検出し、還元前は検出しません。

代替品：Calbiochem 393207

濃度：ロット固有のデータシートを参照してください。