Clonación molecular y expresión de proteínas
El objetivo de la clonación molecular es insertar el gen de interés (GOI) en un vector plasmídico, un fragmento circular de ADN que contiene diversos elementos para facilitar la clonación, la selección de clones y la expresión proteica. Los investigadores suelen utilizar enzimas de restricción de ADN y ligasa para insertar el GOI en el marco de lectura correcto dentro del vector de expresión, con el fin de lograr la posterior expresión de la proteína. A continuación, este vector se inserta en una célula que expresará la proteína codificada por el GOI, o bien la expresión de la proteína se lleva a cabo mediante sistemas de síntesis de proteínas sin células.
Una vez expresada la proteína, se puede estudiar su función en cuanto a cómo afecta a la señalización celular, la morfología u otros aspectos dentro de la célula. Alternativamente, la proteína puede expresarse en grandes cantidades, purificarse y utilizarse en numerosas aplicaciones posteriores. Para obtener más información, explore nuestra amplia oferta de reactivos y recursos fiables disponibles a lo largo de todo el flujo de trabajo de clonación y expresión para sistemas de expresión de proteínas de insectos, bacterias y mamíferos.
Products
Enzimas modificadoras del ARN y el ADN
Durante la clonación molecular, los investigadores suelen utilizar enzimas de restricción para cortar el ADN y otras enzimas, como las que modifican el ARN y el ADN, para añadir, eliminar o alterar grupos químicos en los ácidos nucleicos. Para satisfacer las diversas necesidades de investigación, ofrecemos una amplia gama de estas enzimas esenciales, entre las que se incluyen la fosfatasa alcalina, la proteasa, la ARN polimerasa T7, la pirofosfatasa, la ribonucleasa A y la ADN ligasa T4. Nuestros reactivos, combinados con tampones especialmente formulados, ayudan a garantizar una alta eficiencia y fiabilidad en la manipulación del ADN y el ARN.
Sistema pET de Novagen®, vectores Simplicon® y sistemas de expresión de proteínas UCOE®
Nuestros vectores de expresión en E. coli, insectos y mamíferos simplifican la selección de transformantes positivos. Entre los productos más destacados se incluyen:
- El sistema Novagen® pET está reconocido como el estándar de referencia para la clonación y expresión de proteínas recombinantes en sistemas bacterianos.
- El sistema de expresión de proteínas in vivo Simplicon® ofrece un sistema de expresión basado en ARN autorreplicante, sintético, ajustable y que no se integra en el genoma. La expresión Simplicon® genera una expresión proteica inmediata y altamente sostenida de múltiples genes en células humanas transfectadas sin riesgo de integración en el genoma.
- La tecnología del vector de expresión UCOE® (Ubiquitous Chromatin Opening Element) permite obtener gramos de proteína en menos de 30 días en células de mamíferos transfectadas de forma estable. La tecnología de expresión UCOE® evita el silenciamiento del transgén y proporciona una expresión génica más consistente, estable y de mayor nivel (hasta 20 veces superior) que los vectores convencionales, independientemente del sitio de integración cromosómica.
Reactivos para la transformación de bacterias y levaduras
La transformación bacteriana consiste en insertar ADN foráneo en bacterias mediante métodos como el choque térmico y la electroporación. Nuestra gama de células competentes está diseñada para una expresión óptima de plásmidos y proteínas, incluso en condiciones experimentales difíciles. Entre los productos más destacados se incluyen:
- Las células competentes NovaBlue® están optimizadas para garantizar la eficiencia y la conservación de los plásmidos, lo que permite obtener preparaciones de bibliotecas de calidad superior y una mayor estabilidad de los plásmidos.
- Los sistemas Rosetta™, Origami™ y Overnight Express™ mejoran el plegamiento adecuado de las proteínas y aumentan la solubilidad o la expresión de proteínas citotóxicas.
Para la transformación de levaduras, ofrecemos protocolos sencillos y productos escalables que se integran a la perfección en los flujos de trabajo de expresión de proteínas.
Para la investigación con células de mamífero, consulta nuestra página de transfección para conocer otras opciones.
Vectores plasmídicos de BCCM/GeneCorner
Explora nuestra amplia oferta de vectores plasmídicos de BCCM/GeneCorner, un repositorio de plásmidos único y certificado por la ISO, gestionado por el Departamento de Biología Molecular Biomédica de la Facultad de Ciencias de la Universidad de Gante (UGent). Esta variada colección incluye una amplia gama de plásmidos para clonación y expresión de proteínas recombinantes en diversos organismos diana, lo que respalda la investigación modernizada en biología molecular y proteica.
La venta de cada producto está sujeta a los términos y condiciones de Sigma-Aldrich para la venta a usuarios finales que adquieran productos de terceros, así como a cualquier restricción legal, reglamentaria o de otro tipo impuesta por la ley.
- Solo podrá utilizar los productos de forma lícita con fines de investigación, docencia o control de calidad. Cualquier uso comercial de los productos requiere la autorización previa por escrito del proveedor y puede estar sujeto a un acuerdo por escrito. Dicha autorización no se denegará sin motivo justificado. Por «uso comercial» se entiende el uso de los productos con fines lucrativos (como la reventa, el arrendamiento, el intercambio, la concesión de licencias u otra transferencia de los productos con fines lucrativos, así como cualquier uso de los productos para realizar actividades de servicios con fines lucrativos).
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Selecciona las células competentes según su aplicación, su eficiencia de transformación y su genotipo. También ofrecemos una lista de marcadores de E. coli a modo de referencia.
- Artículo: Sistema de expresión de proteínas in vivo Simplicon™
Simplicon: A non-genome integrating, tunable and sustained protein expression system in human cells, based on a single, polycistronic, and self-replicating synthetic RNA.
- Cloning & Expression Vectors
Expression Vectors for Bacterial, Mammalian and Insect Cell Systems. Featured are a variety of tags, promoters and elements for secretion, transient, stable and bicistronic expression.
- Protein Expression Systems
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Molecular cloning inserts genes into plasmid vectors for protein expression in different studies.